新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统的建立及应用的任务书.docx

新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统的建立及应用的任务书
任务书
任务标题：
新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统的建立及应用
任务目的：
反式剪接是真核生物中一种普遍存在的剪接调控过程，它能够在同一基因的前体mRNA上产生不同的可变剪接异构体，从而提高基因的多样性。现有的反式剪接机制主要包括ALE、RI和SE，然而，这些机制并不能完全解释所有的反式剪接事件，这要求我们进一步寻找新的反式剪接机制。最近实验研究中发现，某些内含子的断裂能够诱导异沟剪接事件发生，从而产生新的剪接异构体。本项目旨在建立一种新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统，并探究其在基因调控和转录后调控中的应用。
任务内容：
1.开发新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统。
（1）选择合适的内含子作为诱导断裂的试验对象。
（2）克隆目标蛋白质外显子及其前体mRNA。
（3）构建含有诱导断裂内含子的反式剪接体系。
（4）通过验证反式剪接体系确定新型反式剪接机制。
2.探究新型反式剪接机制在基因调控中的应用。
（1）构建调控基因表达的载体，固定新型反式剪接机制在相应的位点。
（2）利用不同细胞系表达携带新型反式剪接机制的基因或RNA。
（3）检测不同细胞系中新型反式剪接机制的表达及调控效果。
3.探究新型反式剪接机制在转录后调控中的应用。
（1）设计siRNA，并利用RNA干扰技术沉默新型反式剪接机制影响下游基因的表达和功能。
（2）检测沉默后下游基因的表达及功能变化情况。
（3）筛选特定化合物，并测试其对新型反式剪接机制的调节作用。
任务成果：
1.新型断裂蛋白质内含子介导的蛋白质反式剪接系统的建立，包括反式剪接体系、目标蛋白质外显子及其前体mRNA、验证反式剪接体系等。
2.新型反式剪接机制在基因调控中的应用研究成果，包括调控基因表达的载体、不同细胞系中新型反式剪接机制的表达及调控效果等。
3.新型反式剪接机制在转录后调控中的应用研究成果，包括设计的siRNA、沉默后下游基因的表达及功能变化情况、特定化合物对新型反式剪接机制调节作用等。
任务时间：
本项目计划在18个月内完成。
预算：
本项目预计需要人员费用、实验室材料费用、仪器设备费用等共计200万。其中，人员费用约为50万，实验室材料费用约为100万，仪器设备费用约为50万。
参考文献：
1.ShiY.Alternativesplicing:decodinganexpansiveregulatorylayer.CurrentOpinioninPlantBiology,2017,35:63-68.
2.Gutierrez-MazariegosJ,etal.Theemergingdiversityoftheexon-intronsplicinglandscape.Rna,2016,22(8):1257-1268.
3.LareauLF,etal.UnproductivesplicingofSRgenesassociatedwithhighlyconservedandultraconservedDNAelements.Nature,2007,446(7138):926.