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AMPK-mTOR通路在脂多糖诱导的人鼻粘膜上皮细胞自噬的分子机制研究的任务书
一、研究背景
鼻黏膜是在鼻腔内膜下长居不动的威胁，它是一种重要的生理屏障，可阻止来自鼻腔和周围环境的细菌、病毒和气体的进入，从而保护呼吸系统的健康。然而，鼻腔黏膜易受到气体、尘埃、烟雾等环境因素的侵害，从而导致严重的鼻炎、鼻窦炎、变形鼻炎等疾病。因此，了解鼻粘膜受到损伤后的细胞应答机制和分子调节机制，对于表明鼻腔流感、感冒等呼吸系统疾病的发病机制，具有重要的理论和实践意义。
自噬作为细胞损伤和应激的适应性反应，在鼻粘膜上皮细胞中具有重要的生理和病理功能。多糖作为一种常见的环境刺激因素，可以诱导鼻粘膜上皮细胞进行自噬，从而在某种程度上减少对细胞的损伤。自噬发生的过程涉及一系列的分子机制，其中，AMPK-mTOR通路作为自噬调节的主要信号通路，以其独特的特点在广泛的自噬调节中发挥着重要的生理功能。
二、研究目的
本研究的目的是探讨AMPK-mTOR通路在脂多糖诱导的鼻粘膜上皮细胞自噬中发挥的作用及其机制，为揭示鼻粘膜细胞自噬调节机制提供新的理论依据。具体研究任务如下：
1.通过脂多糖处理，建立鼻粘膜上皮细胞自噬模型，观察自噬体形成情况。
2.检测AMPK-mTOR信号通路中关键蛋白激活的变化，包括AMPK、mTOR、GSK-3和ULK1等蛋白的表达及其磷酸化状态。
3.通过药理干预方法，篡改AMPK-mTOR通路的活性，观察对鼻粘膜上皮细胞自噬的影响。
4.观察自噬的下游效应，包括线粒体功能、生长和凋亡等。
5.建立自噬蛋白组学分析系统，进行全谱分析。
三、研究方法
1.建立脂多糖诱导的鼻粘膜上皮细胞自噬模型
将人鼻粘膜上皮细胞（HNEpC）培养至70-80%的密度，使用0.05mg/ml的脂多糖刺激48小时，观察自噬体的形成情况。
2.检测AMPK-mTOR通路中关键蛋白的表达与磷酸化状态
使用Westernblot法检测AMPK、mTOR、GSK-3和ULK1等蛋白及其磷酸化状态的变化，分析脂多糖诱导的AMPK-mTOR通路的活性变化。
3.药理干预AMPK-mTOR通路活性
使用AMPK拮抗剂和mTOR特异性抑制剂干预AMPK-mTOR通路的活性，观察自噬体的形成情况，判断干预AMPK-mTOR通路对脂多糖诱导的鼻粘膜上皮细胞自噬的影响。
4.观察自噬的下游效应
通过观察脂多糖和AMPK-mTOR通路干预对线粒体功能（如线粒体膜电位等）、生长和凋亡等的影响，评估鼻粘膜上皮细胞自噬的下游效应。
5.建立自噬蛋白组学分析系统
通过使用高通量质谱仪器和生物信息学分析将自噬相关蛋白从鼻粘膜上皮细胞中鉴定出来，建立全谱分析系统，从而获得自噬是否涉及其他蛋白的信息。
四、预期成果
本研究预计通过检测AMPK-mTOR信号通路中关键蛋白的变化，得出AMPK-mTOR通路在脂多糖诱导的人鼻粘膜上皮细胞自噬中发挥的作用及其机制，并可建立自噬蛋白组学分析系统，阐明自噬标志物与其它蛋白质的相互作用，从而更好地揭示鼻粘膜上皮细胞自噬的分子调节机制。这将有助于发展更有效的预防和治疗鼻炎、鼻窦炎等呼吸系统疾病的新策略。