体外培养骨髓间充质干细胞对小肠上皮细胞IEC-6增殖的影响的任务书.docx

体外培养骨髓间充质干细胞对小肠上皮细胞IEC-6增殖的影响的任务书
任务书
项目名称：体外培养骨髓间充质干细胞对小肠上皮细胞IEC-6增殖的影响
项目背景
小肠是消化道中最长的一段，其表面的上皮细胞非常丰富，起到吸收和分泌的作用。当小肠上皮细胞受到损伤或病理刺激时，其再生和修复能力十分重要，尤其是在小肠炎症、肠道肿瘤和炎症性肠病等疾病的治疗中。
骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种产生于骨髓中的成熟细胞，具有多向分化潜能和良好的免疫调节作用。其在组织工程、再生医学和治疗等方面有着广泛的应用前景。研究表明，BMSCs可以促进组织修复和再生，对于小肠上皮细胞的再生和修复也具有一定的作用。
因此，本项目旨在探究体外培养的BMSCs对小肠上皮细胞IEC-6的增殖作用，以期为小肠损伤修复和再生提供新的治疗思路和技术支持。
研究目的
1.筛选出适宜的培养条件和BMSCs密度，以获得最佳的BMSCs对IEC-6增殖的促进作用；
2.研究BMSCs对IEC-6增殖的通路机制；
3.探究BMSCs对IEC-6细胞凋亡、增殖和生长因子表达的影响；
4.评估BMSCs在小肠上皮细胞IEC-6损伤修复和再生中的应用前景。
研究任务
1.BMSCs的体外培养
采用自体小鼠骨髓进行BMSCs的提取和体外培养，主要步骤包括：
（1）将小鼠骨髓摘出并用PBS冲洗干净；
（2）使用培养液和10%FBS将骨髓细胞转移到T-75培养瓶中；
（3）将培养瓶放置于37°C的CO2孵化箱中，培养2-3天，直至细胞密度达到70-80%；
（4）用0.25%胰酶进行消化，并加入DMEM/10%FBS培养基进行过筛和提纯，得到BMSCs；
（5）BMSCs经过3-4次传代至稳定状态。
2.BMSCs对IEC-6增殖的影响
将IEC-6和BMSCs以不同密度共同培养，测定其对IEC-6增殖的促进作用，包括：
（1）MTT实验：在培养特定时间后，将MTT溶液加入培养基中，并进行OD值检测；
（2）流式细胞术：检测细胞周期和增殖指数，探究BMSCs对IEC-6增殖的通路机制；
（3）Westernblot：检测BMSCs对IEC-6细胞凋亡、增殖和生长因子表达及其通路机制。
3.应用前景评估
将BMSCs进行适当的处理并注射到小鼠小肠中，观察BMSCs对小肠损伤修复和再生的效果，包括：
（1）HE染色：观察BMSCs对小肠上皮细胞IEC-6的促进作用和对小肠损伤修复的影响；
（2）免疫组织化学：检测BMSCs对小肠增殖因子VEGF、EGF、bFGF、HGF、TGF-β和PDGF等的表达及其通路机制。
研究内容
1.文献调研
根据本课题的研究目的，收集和整理关于体外培养BMSCs对小肠上皮细胞IEC-6的促进作用、生长因子表达及通路机制相关的文献和资料。
2.培养BMSCs并筛选最佳培养条件
采集自体小鼠骨髓，进行BMSCs的体外培养，并筛选出最适宜的培养条件和BMSCs密度，以获得最佳的BMSCs对IEC-6增殖的促进作用。
3.检测BMSCs对IEC-6细胞增殖和生长因子表达及通路机制的影响
采用MTT实验、流式细胞术和Westernblot技术，检测BMSCs对IEC-6细胞凋亡、增殖和生长因子表达及其通路机制，分析BMSCs促进IEC-6增殖的作用机制。
4.应用前景评估
将BMSCs进行适当的处理并注射到小鼠小肠中，通过HE染色和免疫组织化学检测BMSCs在小肠损伤修复和再生中的应用前景。评估BMSCs在小肠上皮细胞IEC-6损伤修复和再生中的作用和效果。
研究时间
本项目计划执行时间为12个月。
研究预期成果
1.确定体外培养BMSCs对小肠上皮细胞IEC-6的促进作用机制；
2.揭示BMSCs在小肠损伤修复和再生中的作用机制；
3.评估BMSCs在小肠上皮细胞IEC-6损伤修复和再生中的应用前景。
参考文献
1.Guo,J.,etal.(2014).Theeffectofbonemarrowmesenchymalstemcellsonthecellcycleandexpressionoftransforminggrowthfactor-β1insmallintestineepithelialcells.JournalofBiologicalRegulatorsandHomeostaticAgents,28(3),427–435.
2.Zhang,Z.,etal.(2017).HydrogensulfidedonorGYY4137suppressesproliferationandinflammationinsmallintestinalepithelialcellsviaNF-κBpathway.InternationalJournalofClinicalandExpe