白桦酯醇诱导Hela细胞凋亡及作用机制的体外研究的任务书.docx

白桦酯醇诱导Hela细胞凋亡及作用机制的体外研究的任务书
任务书
一、研究背景及意义
癌症是全球性的健康问题，其中宫颈癌是妇女常见的高发癌症之一，其发病率和死亡率逐年增加。传统的癌症治疗方法包括化疗、放疗和手术治疗，但这些治疗方法存在腐蚀性、富毒性、副作用大等弊端。因此，寻找有效、安全、具有针对性的抗癌治疗方法有着十分重要的意义。
天然植物提取物中含有多种活性成分，具有广泛的生物活性和药用价值。近年来，越来越多的研究表明，天然植物提取物中含有的化合物可以抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡。因此，利用天然植物提取物研发抗癌药物已成为当前的研究热点。
白桦树是一种常见的落叶乔木，其皮层中含有丰富的天然化合物。前期研究已经表明，白桦树皮提取物在抗肿瘤方面具有潜在的疗效。而白桦酯醇作为白桦树皮提取物中具有活性的成分之一，具有多种生物活性和药用价值，已成为抗癌药物研究的热点。
本次研究旨在探究白桦酯醇对Hela细胞的抗增殖和诱导细胞凋亡作用，分析其作用机制，为其作为潜在的抗宫颈癌药物的研发提供参考。
二、研究内容
1.确定白桦酯醇对Hela细胞增殖的抑制浓度
在不同浓度下，分别用MTT法检测不同处理时间对Hela细胞增殖的抑制作用，并计算出其半数抑制浓度（IC50）。
2.探究白桦酯醇对Hela细胞凋亡的诱导效果
采用AnnexinV-FITC/PI双染色法检测分别在IC50和2IC50的浓度下处理不同时间后Hela细胞的凋亡率。另外，采用DAPI染色法观察白桦酯醇处理Hela细胞后细胞核形态的变化。
3.揭示白桦酯醇诱导Hela细胞凋亡的机制
采用WesternBlot法检测白桦酯醇对Hela细胞细胞周期和细胞凋亡相关因子的影响。包括Bcl-2/Bax、c-caspase3和PARP的蛋白表达，以及细胞周期相关蛋白CDK2和cyclinA的表达情况。
三、研究方法
1.细胞培养
采用RPMI1640培养基，温度为37℃，CO2浓度为5%的条件下培养Hela细胞。实验开始前，把细胞取出，并进行消毒、转液等操作。
2.MTT法
按照MTT试剂盒使用说明，制作MTT溶液，并将不同浓度的药物处理的Hela细胞分别在不同时间内接种到96孔板中，加入MTT试剂，并用溶剂让形成的晶体溶解，用ELISA检测器检测OD490值，计算细胞增殖的抑制率。
3.双染色法
在不同处理条件下，收集Hela细胞，用PBS清洗，再用AnnexinV-FITC/PI染色试剂染色30分钟后，在流式细胞仪上检测并计算凋亡率。
4.DAPI染色法
在不同处理条件下，收集Hela细胞，用PBS清洗，再用DAPI染色试剂染色，用荧光显微镜观察不同处理条件下Hela细胞核的形态变化。
5.WesternBlot法
在不同处理条件下，采集Hela细胞，用细胞裂解液溶解后进行蛋白提取和浓缩，用SDS-PAGE电泳分离并转移于nitrocellulose膜上，用BCA检测蛋白的浓度后进行WesternBlot实验。
四、研究预期结果
通过本次研究，预期能够初步确定白桦酯醇对Hela细胞增殖抑制浓度，并进一步探究白桦酯醇对Hela细胞的凋亡诱导效果。同时，揭示白桦酯醇诱导Hela细胞凋亡的机制，从分子水平上，进一步分析其抗癌作用机制，为后期的抗癌药物研究提供理论依据和实验依据。
五、参考文献
1.LiG,LiuD,ZhangY,etal.AntitumorActivityofBetulinicAcidfromaMacrocystispyrifera-AssociatedMarineBacteriumAgainstaHumanGlioblastomaCellLine[J].Marinedrugs,2018,16(9):293.
2.ZhouL,PanY,WangQ,etal.Syntheticstudiesandantiproliferativeactivityofbetulinicacidderivatives[J].Bioorganic&medicinalchemistry,2018,26(7):1439-1451.
3.GoulartdaSilvaM,DuarteS,RibeirodePaulaJM,etal.Anti-tumoractivityofbetulinicacidderivatives:apatentreview(2008-present)[J].Expertopinionontherapeuticpatents,2018,28(9):661-676.