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FEV在急性髓系白血病细胞归巢和扩增中的作用及机制研究的开题报告
一、研究背景和意义
急性髓系白血病（AML）是一种恶性血液病，其特点是骨髓内大量白血病细胞（LC）的存在，这些LC通常都是由于基因异常等导致的，对治疗有一定的抵抗性。因此，对于AML的治疗研究是非常关键的。近年来，越来越多的研究表明，一种名为肿瘤特异性巨噬细胞（tumor-associatedmacrophages,TAMs）的免疫细胞能够促进AML细胞归巢和增殖，从而成为研究热点。
细胞因子诱导细胞扩增分化是一种常见的细胞行为，其中一些细胞因子的调节机制被认为是一种重要的治疗策略。其中，肺炎嗜血杆菌外毒素（FEV）是一种强效的免疫刺激剂，被证明对多种肿瘤具有免疫调节作用。在肿瘤病人体内，FEV在TAMs等免疫细胞的参与下，可能会对AML细胞扩增和归巢产生一种促进作用，但其具体机制尚不清楚。
因此，本研究旨在探讨FEV在AML细胞归巢、扩增及其机制上的作用。
二、研究方案
本研究将采用体外和体内实验方法来探讨FEV在AML细胞归巢、扩增及其机制上的作用。
A.实验1
1.实验目的
借助一系列细胞实验方法研究FEV对AML细胞的归巢和扩增是否有促进作用，同时探讨其机制。
2.实验流程
①体外培养实验
a.检测FEV对骨髓间充质细胞（BMSCs）的增殖和分化的影响，并分离与纯化BMSCs。此外，观察TAMs作为FEV活性上调剂量规范，评估其对AML细胞生长和扩增的影响。
b.使用Transwell实验来考察FEV对AML细胞入侵能力的影响，以评估其归巢作用。
c.通过流式细胞仪来检测AML细胞的增殖，以评估FEV对其扩增的促进作用。
②体内实验
a.制作AML动物模型。将人类AML细胞注射到NCG小鼠的骨髓孔内。
b.将小鼠分为实验组和对照组，用不同浓度的FEV治疗实验组，对照组注射生理盐水。
c.通过免疫组织化学染色观察AML细胞在实验组和对照组的扩增情况。分析FEV对AML细胞扩增的促进作用及其机制。
3.实验预期结果
通过上述实验，我们期望获得以下预期效果：
a.FEV可促进TAM的生长和促进AML细胞的入侵和扩增。
b.FEV参与调节TAM的功能，通过激活其产生IL-1β和IL-6等细胞因子，从而促进AML细胞的归巢和扩增。
B.实验2
1.实验目的
检测FEV对AML细胞在体内的免疫微环境和治疗效果的影响。
2.实验流程
①制作小鼠AML模型。
a.使用克隆细胞株K562，在NCG小鼠的体内原位诱导AML。
b.动物分类：在实验组注射不同浓度的FEV，对照组注射生理盐水。
②通过流式细胞仪、免疫组织化学染色、RT-PCR和WesternBlot等技术检测小鼠体内的免疫微环境的改变及AML细胞的存活情况和治疗效果。
3.实验预期结果
通过上述实验，我们期望获得以下预期效果：
a.FEV对AML小鼠模型的生存率有着显著的影响。
b.FEV可能通过调节免疫微环境，抑制AML细胞的生长和扩增。
c.FEV与TAMs及其产生的细胞因子之间存在着正向反馈环，从而促进AML细胞在体内的扩增。