答辩(铁皮石斛多糖.pptx

目录1.组培铁皮石斛多糖简介及国内外研究现状1.2铁皮石斛国内外研究现状（3）购买已有技术，做成中成药。小规模临床试验证明，在化疗及治疗心血管疾病方面，铁皮石斛中成药辅助疗效十分显著。以片剂口服方式，可部分替代扩张血管的西药烟酸注射液。
随着功能开发和应用技术的不断发展，需求量在不断上升，目前是国内近百种药品和保健品的必需原料，全国涉及用到石斛类的制药厂和保健品加工企业有100多家。铁皮石斛主要的消费市场在我国的浙江和上海一带，另外就是港澳和东南亚地区，北京、广州、成都等地近几年市场发展较快，从我国石斛联盟发布的市场信息来看，铁皮石斛的市场和销售都在快速发展。
从相关信息来看，目前世界中草药市场销售额为160亿美元，而且每年正以20~30％的速度增长，而我国的中草药产业占整个医药市场的40％左右，近五年来以年平均20％的高速度递增，铁皮石斛所占中草药产业比例越来越高。
2.试验目的和意义
2.1试验目的：
铁皮石斛多糖的提取分离工艺已较为成熟，但石斛的品种繁多，应开展对其他种的石斛多糖结构的提取分离研究。
本文通过以组培铁皮石斛为材料，以组培铁皮石斛提取出的多糖为主要研究对象，对照组培铁皮石斛苗和维生素C进行总还原能力、清除羟基自由基、清除超氧阴离子和清除DPPH(1，1-二苯基-2-苦基苯肼自由基)能力进行测定。通过此试验拟阐提取出的铁皮石斛多糖的抗氧化功能特性。
2.2试验意义：
自由基（freeradical）是一类含有未配对电子的基团、分子或原子，主要包括超氧阴离子、羟基自由基等，是人体内的代谢产物，在正常情况下处于动态平衡，且浓度很低。当这一平衡被打破，就会对机体造成损害引发一系列疾病。
本试验尝试性的以组培铁皮石斛为对象，研究组培铁皮石斛多糖、维生素C和组培铁皮石斛苗清除自由基的能力，为组培铁皮石斛多糖抗氧化性的研究提供基础数据以及组培铁皮石斛多糖的综合开发利用奠定理论基础。

3.试验方法和内容3.1.2操作要点
(1)破碎：组培石斛苗要充分的研磨破碎，有利于多糖的溶解分离。
(2)提取：破碎的石斛组织于90℃、料水比1:20的条件下回流提取1小时，重复三次，合并提取液。
(3)脱脂：浓缩液中加入100mL石油醚水浴回流至沸腾，抽真空过滤。
(4)脱蛋白：以50mL多糖浓缩液，15mL氯仿，5mL正丁醇为标准比例混合振荡，不加热，离心机离心至离液面交界处无白色混悬物，也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可，并分别提取。
(5)干燥：脱色后的多糖液于烘箱中用60℃热风干燥至恒重，保存备用。
3.2组培铁皮石斛多糖含量的测定
试验采用蒽酮硫酸法测定组培铁皮石斛多糖含量。
3.2.1葡萄糖标准曲线的绘制
精密称取经105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.05g（精确到0.0001g），用温蒸馏水溶解，并定容至1000mL。此溶液质量浓度为50μg·mL-1。分别取上述葡萄糖溶液0mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL到25mL具塞试管中，用蒸馏水补足到2mL；在冰水浴中加入4mL的2g/mL的蒽酮-硫酸溶液，摇匀，置于沸水中加热煮沸5min，取出后用流动水冷却至室温，以零管为空白，于625nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，对应吸光值为纵坐标建立标准曲线，如下图所示。

3.2.2组培铁皮石斛多糖含量的测定
分别取组培铁皮石斛多糖储备液(50μg·mL-1)和组培铁皮石斛苗储备液(50μg·mL-1)1.6mL到25mL具塞试管中，用蒸馏水补足到2mL；在冰水浴中加入4mL的2g/mL的蒽酮-硫酸溶液，摇匀，置于沸水中加热煮沸5min，取出后用流动水冷却至室温，以葡萄糖样品中零管为空白，于625nm处测定吸光度。由标准曲线求得对应的多糖浓度，以葡萄糖计。
3.3FRAP法测定组培铁皮石斛的总抗氧化能力
3.3.1硫酸亚铁标准曲线的绘制
取不同体积5～140μL的1mmol/LFeSO4溶液，用蒸馏水补足至2mL，再加入配制好的FRAP工作液3mL，混匀后于37℃反应30min，在593nm下测定样品液的吸光度值，确定还原力标准曲线。
以吸光度（Y）对葡萄糖质量浓度（X）回归，得到回归方程y=0.0516x-0.0041，所得葡萄糖标准曲线如下图1所示。

3.3.2组培铁皮石斛多糖总抗氧化能力的测定
分别精密移取不同样品质量50～300μg的3种待测样品加入到有刻度试管中，加蒸馏水至2mL，再加入FRAP工作液3mL，混匀后于37℃反应30min，取出后立即在593nm处测定吸光度。以不加样品组为参照，测定样品吸光度值，每个样品平行测3次，取平均值。根据还原力标准曲线，计算相同吸光度值的FeSO4当量浓度，记为FRAP值。
3.4组培铁皮石斛多糖清除羟