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水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株的构建和趋化受体基因研究的开题报告
一、选题背景及意义
水稻是我国重要的粮食作物之一，水稻白叶枯病是水稻生长过程中较常见的一种病害。该病害可导致水稻植株的叶片变为白色、枯死，严重时会造成水稻减产或香糯性下降等问题，给农业生产和粮食安全带来了不小的威胁。水稻白叶枯病的发病主要由一种名为“白叶枯病菌”的病原微生物引起。目前，研究人员已经发现了一些针对该病害的病理调控方法，但是通过从基因水平上防治该病害的措施却非常有限。
相关研究表明，水稻白叶枯病菌的致病能力与其种类和株系有关，其中水稻白叶枯病菌PXO99A菌株在多数情况下为高致病株系。对此，研究人员提出了构建水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株的想法，以此使得该病原微生物在水稻上对植物的生长性影响更低。另外，一些趋化受体基因已经被证明与白叶枯病菌的侵染过程中起到了重要作用，针对这些趋化受体基因开展基于分子生物学的研究对于深入解析这种病害的致病机理，寻找防治措施具有重要的意义。
二、研究内容与目标
本课题主要由两部分组成：
1.水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株的构建
PXO99A菌株是高致病菌株系，其与水稻之间的互动过程中经常出现共进化现象。该病原微生物在水稻上的发生难以预防和控制，因此开展对该病原微生物的分析和控制该病害具有重要的意义。本课题将针对PXO99A菌株相关领域的研究，选取适当的生物学基础材料，通过基于分子生物学技术和育种技术将其从高致病水稻白叶枯病菌株系中分离出来，并建立水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株。
2.趋化受体基因相关研究
PXO99A菌株的侵染与内部信号传递紧密相关，趋化受体基因在这个过程中发挥重要作用。因此，在本课题中将通过基于PCR技术检测这些趋化基因的表达，进而研究其对PXO99A菌株在水稻中的趋化过程的影响，这有助于深入探究该病害的重要生物学机制，为防治措施的研究提供参考。
三、技术路线与方法
1.水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株的构建
（1）筛选高致病菌株以及菌株分离
从高致病菌株系中筛选出适宜的PXO99A株系，采用菌株分离技术将这些菌株分离出来。
（2）菌株鉴定
本课题在回肠杆菌基因工程技术、质粒转移和靶向基因敲除等基础技术的支持下，将相关标志基因和抗生素抑制剂等药物导入到PXO99A株系中，再通过药物筛选方法对转化细胞筛选治疗合适的治疗方法，并通过对白叶枯菌菌株的PCR检测来证明其无法向其它植物和株系转移。
2.趋化受体基因相关研究
（1）趋化受体基因的扩增
通过PCR技术将基因组DNA扩增出趋化受体基因，应用基因库筛选和网格卡片实现扩增、筛选和大规模克隆。
（2）趋化受体基因的表达检测
采用基于qPCR技术的方法或RNA-Seq测序检测趋化受体基因的表达水平，这有助于探究该病害的致病机制及其防治措施。
四、预期成果及意义
1.水稻白叶枯病菌PXO99AMCP--free菌株的构建
构建PXO99AMCP--free问株，有效地控制了该病原微生物在水稻上对植物的生长性影响，为研究和制订相关的防治措施创造了良好的条件。
2.趋化受体基因相关研究
深入探究PXO99A菌株的内在生物学机制，研究其对水稻生长和发育的影响，有助于找到新的病害诊断和防治方法。
本课题结果将为水稻白叶枯病的病理调控和防治措施提供重要的依据和理论基础，对于促进水稻产业的发展、维护农业生态环境稳定发展意义重大。