血涂片制备和染色.ppt

复习血液标本采集和抗凝剂选择一、采血方法4部位：WHO推荐中指或无名指尖内侧为宜，耳垂采血受温度影响大；半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定。
采血步骤及注意事项：应严格实行一人一针制；穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。用消毒干棉球擦去第一滴血，以后流出的血液可以使用。二、抗凝剂选择乙二胺四乙酸（EDTA）盐草酸盐（sodiumoxalate）肝素（heparin）枸橼酸盐（枸橼酸三钠）3.血液标本检验后的处理四：血液涂片制备1：玻片的清洁2、血液涂片制备图1-3血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）[血涂片质量评价]1718五、血液细胞染色碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核
的染料。如亚甲蓝、天青。

酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧
烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合
细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、
嗜酸性颗粒成分等。

复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料细胞染色原理：（一）瑞氏染色法[染色原理]图1-4瑞氏染色原理示意图[PH对细胞染色有影响][试剂][瑞氏染色方法]【质量控制】29【染色结果评价】（二）姬姆萨染色法吉姆萨染料1.0g
甘油66.0ml
甲醇（AR）66.0ml

[染色方法]
1.甲醇固定干燥血膜3-5min
2.将血膜在染液中浸染10-30min
3.流水冲洗,待干后镜检
（三）瑞氏-吉姆萨染色【瑞氏-吉姆萨染色试剂】[瑞氏-吉姆萨染色方法]【方法学评价】六、血细胞显微镜计数法六、血细胞显微镜计数法显微镜细胞计数法【试剂】各种不同的专用稀释液或染色稀释液。
【器材】
（1）显微镜
（2）微量吸管：Hb吸管：10、20μl两刻度
★毛细玻璃吸管：10、20μl两刻度
一人一管，定期用水银称重法进行校正
误差应<±1%
（3）计数板：血细胞计数板，常用改良Neubauer计数板
计数板的构造：
（4）血盖片规格24mm×20mm×0.6mm，
要求：表面平整（不平整性＜0.002mm），高倍镜检查无裂痕，且本身有一定的重量。
血细胞计数板的构造1855年发明计数红细胞的计数板
血细胞计数板法是最可靠和最经典计数技术
改良Neubauer
计数板计数池计数池划线【操作】（以血WBC计数为例）质量控制(二)、固有误差（inherenterrors)
泊森分布：
SD=m

CV=
注：SD为标准差、m为计数的平均数、CV为变异系数。
由此，计数范围大，计数细胞多，计数误差就小。50