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§1实验室设置及仪器设备§2实验基本操作§3培养基的成分及其配制§4培养条件的选择§1实验室设置及仪器设备1.基本实验室面积60平方米左右,配备的主要仪器设备有:冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜,用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。无菌操作室主要用于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留一个通气窗,并安上排气扇。室内温度由空调控制,光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度为2000-3000lx。2.辅助实验室为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。(1)洗涤液的配制A、新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质,可先用0.5%的去污剂洗刷,再用自来水洗净,然后浸泡在1%~2%盐酸溶液中过夜(不可少于四小时),再用自来水冲洗,最后用无离子水冲洗两次,在100℃~120℃烘箱内烘干备用。先用自来水洗刷至无污物,再用合适的毛刷沾去污剂(粉)洗刷,或浸泡在0.5%的清洗剂中超声清洗(比色皿决不可超声),然后用自来水彻底洗净去污剂,用无离子水洗两次,烘干备用(计量仪器不可烘干)。清洗后器皿内外不可挂有水珠,否则重洗,若重洗后仍挂有水珠,则需用洗液浸泡数小时后(或用去污粉擦洗),重新清洗。聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿,在生物化学实验中已用的越来越多。第一次使用塑料器皿时,可先用8mol/L尿素(用浓盐酸调pH=1)清洗,接着依次用无离子水、1mol/LKOH和无离子水清洗,然后用10—3mol/LEDTA除去金属离子的污染,最后用无离子水彻底清洗,以后每次使用时,可只用0.5%的去污剂清洗,然后用自来水和无离子水洗净即可。金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤(新的可以用热洗衣粉水洗净),需要清洗时,一般用酒精擦洗,然后火焰干燥。E、除菌过滤器用清水冲洗后,用洗液冲洗,再用清水冲洗,最后用蒸馏水冲洗,晾干备用。(一)、灭菌工作是极其重要的。首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴:有菌:凡是暴露在空气中的物体,至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面,未处理的工具和手等。无菌:高压高温处理(工具、器皿、培养基等)物理或化学处理;火烤后的物体;健康的动植物不与内外部表面接触的组织内部可能是无菌的(有时也有内生菌,但不会影响培养,也不会污染)1、物理方法:干热、湿热、过滤(0.25微米)紫外灯、超声波等。2、化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等干热灭菌玻璃器皿、器械 湿热灭菌培养基、蒸馏水、器械、棉塞等 熏蒸灭菌接种室、培养室 过滤灭菌液体培养基、蒸馏水 药剂灭菌培养材料 烧灼灭菌器械、瓶口、棉塞、包头纸 辐射灭菌接种室。培养间适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法:150℃、40min或120℃、120min,如果发现芽孢杆菌,160℃、90~120min适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃维持20~30min注意点:加足水、排尽气、气压降到0时,才能开盖培养基的灭菌一般用高压高温处理,但如果培养基中某些成分遇到高温分解(如某些生长调节剂GA3、玉米素等),就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌灭菌方法:将生长调节剂或酶配成一定浓度,用注射器注入微孔滤膜虑,滤膜孔径0.22~0.45微米。制培养基时,现将培养基高压灭菌