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长叶红砂WRKY转录因子的克隆及特性分析的中期报告 本实验旨在克隆长叶红砂中的WRKY转录因子,并对其进行特性分析。在项目初期,我们进行了实验设计和文献调研,明确了实验目的和方向,并收集了一定数据。目前实验已进入中期,具体进展如下: 1.RNA提取与cDNA合成 我们成功地从长叶红砂中提取了RNA,并通过酶切酶退化酶对RNA进行质量检测,确保RNA质量良好。接着我们进行了cDNA合成,合成的cDNA数量较多,可支持后续的实验。 2.PCR扩增与基因克隆 我们选择了基于已知的WRKY转录因子序列设计引物,进行PCR扩增反应,得到了目标基因的片段。随后进行了PCR产物的电泳,发现预期大小的片段已被扩增出来,证明PCR反应成功。我们将PCR产物进行克隆,并进行测序验证,获得纯化后的目标基因序列数据。 3.bioinformatics分析 我们使用基于NCBI的blast软件对所获得的基因序列进行比对,发现我们的克隆序列与同属于WRKY转录因子家族的其它物种中的序列有很高的相似性。此外,我们使用生物信息学工具对序列进行特性分析,发现它包含基本的组蛋白结构域和典型的WRKY家族的保守特征,支持它属于WRKY转录因子家族。 接下来的工作将会将该基因表达到经过诱导的真核系统中,以进一步验证其在植物生理响应中的表达和功能。同时,我们还将进行基于qPCR的表达谱分析,探究该基因在长叶红砂的不同组织和不同时间点下的表达情况,期望进一步了解其在长叶红砂中的生理功能和调节机制。 通过本次实验,我们成功地克隆了长叶红砂中的WRKY转录因子基因,为其后续功能研究打下了基础。