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种质离体保存优选种质离体保存种质资源保存方法第一节概述二、超低温保存的概念但对植物而言，低温常常是指那些比常温稍低一些的温度。如
果低温超过细胞原生质所能忍受的临界温度，就会致使植物细胞遭
受冻害而死亡。如甜橙树发生冻害的临界温度通常在-6.5℃，枳壳
通常在-20℃左右（沈德绪等，1986）。低温保存（Cryopreservation），是指将植物的组织或细胞经过防冻处理后，在低于-80℃条件下保存的方法。

超低温保存：将植物的组织或细胞经过防冻处理后，在-196℃的极端低温下保存的方法。超低温保存的优点:超低温保存的意义:常用的超低温保存方法：
冷冻诱导保护性脱水的超低温保存法
玻璃化处理的超低温保存法三、超低温保存的研究概况第二节植物材料超低温冻存的细胞学基础根据Luyet的冻结理论（1937），细胞内游离水的冻结温度（-30℃）可认为是细胞冻存的安全温度，因而细胞冻存的两步冻结法一般以-30℃为基础的。
也就是说，控制细胞内外水的冻结状态，是细胞冻存技术的关键。超低温保存的原理5、保持培养细胞形态发生的能力。
冰冻保护剂（Cryoprotectiveagent，CPA）也称抗冻剂，为植物低温保存必不可少。
为此，对于不同的植物种类或材料，应筛选相应的冰冻保护剂，采用适当的降温速度及化冻方式，才能使细胞不受损伤或损伤最小。
1990,Kohmuraetal.
在超低温条件下，生命的代谢和衰老过程也基本停止，故能够实现长时期的保存。
经冻存的材料，不可避免地受到一些伤害，需要小心维护：
1．-2℃/min速度降温至-100℃后投入液氮，或以该速度一直降温至-196℃后投入液氮。
5M)渗透性化合物培养基上培养数小时至数天，再经过硅胶、无菌空气干燥脱水数小时(使含水量降至17～40％)或用藻酸盐包埋后投入液氮保存。
9、便于国际间的种质交换。
Takagietal.
胞中的水由游离水和束缚水组成，其中游离水约占90％，很容易
加冷冻防护剂（0℃）
桑树（Manihotesculenta）
百合（LiliumjaponicumThumb）
超低温保存：将植物的组织或细胞经过防冻处理后，在-196℃的极端低温下保存的方法。
可能是因为藻酸钙的包埋减轻了玻璃化溶液的毒性。
玻璃化处理的超低温保存法
种类：主要有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、葡聚糖(Dextrane)、聚乙二醇(PEG)、白蛋白(Albumin)、羟乙基淀粉(HES)等。第三节超低温保存的方法一、传统的降温冰冻方法
1．-2℃/min速度降温至-100℃后投入液氮，或以该速度一直降温至-196℃后投入液氮。
在冰冻保保护剂的作用下，既可避免在细胞脱水时细胞内产生冰
晶，又能防止因溶质含量增加引起的“溶液效应”。因此，对于原生质
体、悬浮培养细胞等细胞类型一致的培养物，这种方法效果最好。2．快冻法：将材料用玻璃瓶或锡箔纸袋保护后直接投入液氮或液氮的蒸气相中，该方法对高度脱水的材料如种子、花粉及抗寒性很强的休眠枝条或冬芽比较适宜，对含水量高的细胞培养物则不适合。（加速继代、提高培养基渗透压、低温锻炼）
(c)将包埋体置于超净工作台上吹风干燥。
Martínez1999
（降温速度1000℃/min）
在超低温条件下，生命的代谢和衰老过程也基本停止，故能够实现长时期的保存。
超低温保存：将植物的组织或细胞经过防冻处理后，在-196℃的极端低温下保存的方法。
Mandal1995
超低温保存：将植物的组织或细胞经过防冻处理后，在-196℃的极端低温下保存的方法。
豆荚树(Acaciamangium)
葡萄（VitisvinifcraL.
慢速解冻：对于脱水处理后干冻保存的材料，一般认为应先置于0℃下一段时间，再于室温下缓慢解冻效果较好。
低温保存（cryopreservation）是由cryo和preservation组成，在
芦笋（Asparagusofficinalis）4.干冻法：将样品在高浓度(0.5-1.5M)渗透性化合物培养基上培养数小时至数天，再经过硅胶、无菌空气干燥脱水数小时(使含水量降至17～40％)或用藻酸盐包埋后投入液氮保存。该法特别适合于愈伤组织、体细胞胚、胚轴、胚、茎尖、生根苗保存，但不适用于脱水敏感的材料。二、玻璃化保存方法
玻璃化（vitrification）是指液体转变为非晶体玻璃态的固化过程。
使溶液玻璃化有两条途径：一是大幅度提高冷却速率；二是增加溶液浓度。
玻璃化法是指将生物材料经高浓度玻璃化溶液快速脱水
后，直接投入液氮，使材料连同玻璃化溶液同时转变成玻璃
态。在此过程中，水分子没有发生重排，不形成冰晶，不发
生结构和体积的改变，因而不会对材料造成机械损伤。当保
存终止后，通过快速化冻防止去玻璃化的发生。如果材料能
够安全度过冷却和化冻