离体培养金丝桃再生植株的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101584300A
(43)申请公布日2009.11.25

(21)申请号CN200910088199.7

(22)申请日2009.07.13

(71)申请人华中农业大学
地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号

(72)发明人王彩云张晓慧桂大萍王海菲刘峰黄丽莉

(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司

代理人张红兵

(51)Int.CI
A01H4/00

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称
离体培养金丝桃再生植株的方法

(57)摘要
本发明属于植物组织培养技术领
域。公开了一种离体培养金丝桃再生植株

的方法。步骤是：A：将预先培养的金丝
桃不同品种的无菌苗接种于MS基本培养
基中继代培养；B：配制再生培养基：MS
基本培养基+噻重氮苯基脲0.08－
0.8mg/L+α－萘乙酸0.01－0.05mg/L+滤纸
作滤纸桥；C：在无菌条件下，以继代培
养了40－45天金丝桃无菌苗的叶片为外植

体接种于MS在再生培养基中，使其近轴
面朝向所述的再生培养基，暗培养15－25
天后转入光照下培养，24－26天后，获得

再生芽；D：将步骤C的再生芽切下接种
于MS基本培养基中继代培养，获得完整
再生植株。本发明简单易行，操作方便，
再生频率高，可加快切花金丝桃的遗传转
化和的分子育种材料的制备。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、一种离体培养金丝桃再生植株的方法，其步骤是：

1)将金丝桃的茎段灭菌后再切割成1-2cm的带芽茎段接种于附加7.5g/L琼脂和
3g/L蔗糖的MS基本培养基上进行继代培养得到金丝桃无菌苗；

2)切取继代培养了40-45天的步骤1)的金丝桃无菌苗的叶片接种于MS再生培养基
内，使其近轴面朝向所述的MS再生培养基上，暗培养15-25天后转入光照下培养
24-26天，得到金丝桃再生芽；

3)将步骤2)得到的金丝桃再生芽切下接种于附加7.5g/L琼脂和3g/L蔗糖的MS基
本培养基中继代培养，获得完整再生植株；

其中：

所述的MS再生培养基为：MS基本培养基+噻重氮苯基脲0.08-0.8mg/L+α-萘乙酸
0.01-0.05mg/L+滤纸1片作滤纸桥，调培养基的pH至5.8-6.0，在121℃高压蒸汽
灭菌18-22min，备用；

所述的培养材料均置于24-26℃，光照时间为14h/d，光照强度为2500lx的条件下
培养。

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养工厂化快速育苗及分子育种技术领域，更具体涉及一种离
体培养金丝桃再生植株的方法。

背景技术

金丝桃为金丝桃属(HypericumL.)，藤黄科(Clusiaceae)植物，其花色丰富多彩，浆
果绚丽多姿。

近年来在国内外花卉市场上切枝观果切花金丝桃在新型切花中非常流行，主要用于

插花中的配材。市场上观果类金丝桃主要为H.hircinum；H.frondosum，
H.androsaemum和H.inodorum等种间或种内的杂交后代，如‘魅力红’系列
(Hypericum‘MagicalRed’)；天姿粉系列(H.‘PinkyFlair’)、天姿甜心系列
(H.‘SugarFlair’)等。目前在栽培过程中，特别是许多在非洲、南美洲等热带地区种
植的品种，由于土壤中根结线虫的危害，严重破坏了植株的根系，使金丝桃的产量
和观果价值大大降低，严重影响观果金丝桃的切花应用价值。传统的杀虫剂不仅价
格昂贵，无法有效防治线虫，且使用时破坏生态环境，无法满足日益重视的环保要
求。另一方面，由于金丝桃是多年生植物，通过移植或轮作等栽培学方法也不能从
根本上解决病虫害问题，而温室无土栽培对能源损耗提出较高要求。因此，目前对
线虫的控制仍缺乏安全和有效的解决方法。

利用生物技术进行品种改良，获得具强抗病抗虫和高观赏价值的品种是目前金丝桃
育种的主要目标。金丝桃再生体系的建立对提高育种效率及遗传转化和创新种质资
源创新奠定了基础。

国内外对金丝桃属植物再生体系的研究较少。国内主要集中在药用植物贯叶连翘
(Hypericumperforatum)的快繁及愈伤诱导方面，而国外也以贯叶连翘的研究居多。
Cellárová(1992)等人将切割后的胚用浓度为2.22μm或4.40μmBA处理形成的愈伤
能高效的生芽；SonjaGadzovska(2005)利用贯叶金丝桃种子萌发形成的试管苗获得
茎尖外植体再诱导生成大量不定芽。ElianeRomanatoSantarém和
LeandroVieiraAstarita(2003)等人利用贯叶金丝桃的茎段器官发生诱导