质粒DNA的提取与检测.ppt
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质粒常用的质粒载体质粒提取的思路第一部分目一.目的二.原理☆原理示意图三、实验仪器、材料与试剂器材试剂溶液溶液溶液0.5mol/LEDTA(pH8.0)TE(pH8.0)?12000rpm四.操作步骤四.操作步骤分次收集第二部分琼脂糖凝胶浓度与线性核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系影响迁移率的因素常用染料一、实验目的二、实验原理三、常用的电泳缓冲液四.操作步骤五、实验结果与讨论pGFPpBSKM图六
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质粒DNA提取质粒基础知识1.质粒的定义2.质粒的分类1.1质粒的定义1.1质粒的定义天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。一般来说,质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载体。1.2质粒的分类1.质粒、载体的特点2.质粒的构建3.质粒的应用2.1质粒的特点2.1载体的特点2.2质粒的构建2.3质粒的应用2.3质粒的应用2.3质粒的应用1.提取方法2.试剂3.耗材4.设备3.1提取方法3.1提取方法3.1提取方法3.2试剂3.2耗材3.3仪器高压灭菌锅水平电泳仪
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会计学/细菌质粒:细菌质粒是用的最多的质粒类群,其大小从1Kb-200Kb,它们复制时利用宿主细胞复制自身基因组DNA的同一组酶系。严谨型:这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的,与寄主细胞的复制偶联同步。所以,往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝;松驰型:这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的,每个细胞中含有10-200份拷贝,如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒,要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。载体(Vector):用于携
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四川大学实验报告题目:质粒DNA的提取及检测一.实验目的:1.学习碱裂解法提取质粒的原理和方法;2.学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和方法。二.实验原理1.质粒(Plasmid):一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,常常编码一些对宿主有利的酶的基因,这些基因的表型包括抗生素抗性,产生抗生素、限制酶、修饰酶等。2.载体(Vector):要把一个有用的外源基因通过基因工程手段,转化到细胞中去进行繁殖和
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质粒DNA的提取、酶切及检测相关知识常用到的工具酶结构的三大要素:多克隆位点选择标记(耐药性)独立的复制单位种类:质粒噬菌体酵母人工染色体(YAC)质粒(plasmid)实验目的和要求学习和掌握质粒提取的原理与操作、限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。第一部分质粒DNA的提取一、实验目的二、实验原理三、主要试剂溶液II0.2NNaO