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抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备及生物活性测定的综述报告 引言 内毒素是细菌在生长或死亡时释放的一种有害物质,常见的内毒素包括肠杆菌内毒素、金葡菌内毒素等。其中,肠杆菌内毒素是最常规的一种内毒素,也是对动物和人类健康危害很大的一种物质。研究表明,肠杆菌内毒素会对生物体的免疫系统、神经系统、血液系统等组织器官造成不同程度的损伤。因此,怎样快速有效地制备出抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体,成为了当前研究的热点问题之一。 一、抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备 肠杆菌内毒素是一种大分子复合物,主要成分包括内毒素B和内毒素A两个组分。内毒素B部分为针状结构,利用该结构可制备出抗原成分。依据该方法,可将内毒素B结构域中的大部分碱性氨基酸与酸性氨基酸突变,并在结构域表面导入一些疏水氨基酸,从而产生一些表面等电点的终末残基。这些特点带来了抗原性,能够解除紫外线处理的内毒素B的表面性质。制备抗体的过程为:将原料与驴抗山羊卵黄蛋白(驴IgG)结合,使出现」6O钙粘合镜状结构,又称成核树结构,然后将上述混合物纯化,并通过免疫亲吸法减少跨种的非特异性反应,则可获得抗体。 二、抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的生物活性测定 1.胶体金法 胶体金法是一种基于底物颜色改变的快速检测方法,该方法不需要设备显微镜等特定设备,能够在短时间内快速检测出卵黄抗体的浓度。该方法的原理是将金纳米颗粒和抗体结合起来,在特定的物理或化学作用下,产生现象级或分析显色。不同浓度的卵黄抗体会产生不同深度的颜色,从而可分辨出不同浓度的卵黄抗体。该方法具有操作简单、灵敏度高、诊断结果快速等优点,但由于受到金纳米颗粒制备工艺的影响,该方法存在生产技术要求较高的问题。 2.免疫学荧光 免疫学荧光是一种以荧光物质为标记的检测方法,该方法的原理是通过荧光物质将抗体分子与卵黄抗原结合在一起,从而使得抗体分子与卵黄抗原等分子可被荧光显微镜等设备清晰观察到。这种方法可以同时检测卵黄抗体和肠杆菌内毒素,还可以探测卵黄抗体在细胞或组织中的位置。该方法优点在于可以直观地观察检测结果,但缺点在于需要设备昂贵、技术要求高等因素的限制。 3.酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验是一种常见的抗体检测方法,该方法的原理是将抗体结合到微孔板表面,再加入内毒素抗原和过氧化物酶标记的次级抗体,从而测定抗体对被测物的结合情况。由于酶标底物分解后生成的发光物质能够在测量器中产生相应的读数,因此该方法测定结果比较准确,同时还具有灵敏度高、可控性强等优点。但该方法也有缺点,主要表现在设备成本高、操作时间长等方面。 结论 总体来说,抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备可以采取驴抗山羊卵黄蛋白结合的方法,抗体的生物活性测定可以采用多个方法组合,以达到更准确的检测结果。在具体的应用场景中,可以选择胶体金法、免疫学荧光或酶联免疫吸附试验等方法,根据具体需要选取合适的检测方法进行使用。