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博尔纳病病毒核蛋白抗体ELISA检测方法的构建的综述报告
博尔纳病病毒（Bornadiseasevirus，BDV）是一种单股RNA负链病毒，属于病毒科Borna病毒科，是引起Borna病的病原体。Borna病是一种神经系统疾病，主要在马和其他哺乳动物中发生。BDV核蛋白抗体对于Borna病毒的感染与诊断具有重要意义。下面将重点介绍BDV核蛋白抗体ELISA检测方法的构建。
一、BDV核蛋白抗体ELISA检测方法的原理
BDV核蛋白抗体ELISA检测方法是通过将BDV核蛋白与涂层在微孔板上的兔抗纳豆球菌抗体（Anti-proteinA）结合，形成蛋白质固定层。将待检血清或标准品加入微孔中，经过一定时间与BDV核蛋白结合形成复合物，其中BDV核蛋白抗体与BDV核蛋白结合成复合物。再加入特异性的鼠抗兔IgG酶标抗体（HRP-conjugatedanti-mouseIgG），与复合物中的兔抗体结合成三联物。最后加入底物TMB，由于酶激发作用，使TMB分子裂解出可视化的蓝色产物。将酸停止液加入使反应停止，用波长为450nm的微孔板阅读器断定吸光值，从而测定样品中BDV核蛋白抗体的含量。
二、BDV核蛋白抗体ELISA检测方法的具体步骤
1.制备抗原：以BDV核蛋白为抗原，采用SDS-PAGE电泳方法，分离出BDV核蛋白，并用电泳迁移法将其转移到PVDF或Nitrocellulose膜上。用PonceauS染料染色，确定转印效果，然后用蛋白印迹法测定其转移量并进行固定。
2.制备反应器：将兔抗纳豆球菌抗体溶液涂覆在微孔板上，并用磷酸缓冲液将其孵育过夜。
3.准备比物：比物用于标准曲线的构建，可通过灰鼠免疫法、鸟卵清蛋白结合法等方法制备。
4.填板：将待检样品、阴性对照和比物加至标准孔中。
5.孵育：加入BDV核蛋白抗体，并与涂有兔抗纳豆球菌抗体的微孔板孵育，使其结合形成复合物。再加入HRP-conjugatedanti-mouseIgG酶标抗体，与复合物中的兔抗体结合形成三联物，并与马铃薯多糖（potatostarch）孵育。最后加入底物TMB，发生酶转化反应生成蓝色产物。
6.终止反应：加入酸停止液，使反应停止，用450nm的微孔板阅读器测定吸光值，并用标准曲线计算样品中BDV核蛋白抗体的含量。
三、BDV核蛋白抗体ELISA检测方法的优缺点
优点：BDV核蛋白抗体ELISA检测方法具有高灵敏度、特异性和准确性，并且操作简单、快速、易于标准化和批处理。
缺点：BDV核蛋白抗体ELISA检测方法容易受到感染之间血液交叉污染的影响，因此需要严格控制操作环境及及时校准仪器设备。
综上所述，BDV核蛋白抗体ELISA检测方法是一种简便、快速、准确的BDV抗体检测方法，对于诊断和监测Borna病毒感染具有重要意义，但在实际应用中仍需注意操作规范和质量控制。