山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体的构建及阳性细胞株的筛选的任务书.docx

山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体的构建及阳性细胞株的筛选的任务书
任务书
项目名称：山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体的构建及阳性细胞株的筛选
项目背景:
随着生物技术和分子生物学等领域的不断发展，基因工程技术已经成为常规的实验手段之一。其中，基因打靶技术是利用外源性DNA与靶向某个基因进行剪切、编辑或改变序列的一种精准定点基因修饰技术。该技术在研究生命科学和生物医学领域的基因治疗、医学诊断、细胞工程、农业生产等方面发挥着重要的作用。
山羊作为我国重要的畜牧养殖资源，其全球养殖规模仅次于牛、马和猪。而山羊的乳制品也是具有市场潜力的高蛋白、低脂肪、高营养价值的食品。为了提高山羊的生产性能，需要利用基因工程技术研究山羊乳腺代谢途径和乳腺发育调控机制。因此，该项目旨在构建山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体，用于研究山羊乳腺生长和分化。
项目内容:
1.设计山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体。
2.构建山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体。
3.通过转染等方法将山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体转染到山羊乳腺上皮细胞中。
4.通过PCR、Westernblot等技术检测阳性细胞株。
5.对阳性细胞株进行鉴定和筛选，确定不同阳性细胞株的乳腺所表达蛋白的差异性。
项目要求：
1.针对山羊生长激素基因、乳腺特异性基因的细胞信使RNA序列和蛋白质序列进行分析。
2.采用分子生物学技术和生物信息学手段，构建山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体。
3.采用PCR、Westernblot等技术对阳性细胞株进行鉴定和筛选。
4.将不同阳性细胞株的乳腺所表达蛋白差异进行分析。
5.对于实验中的安全保障措施要求高，并按照实验室规范操作。
6.需提交每周的实验进展报告，并定期召开实验进展交流会议。
项目成果：
1.成功构建山羊生长激素基因乳腺特异性基因打靶载体。
2.筛选得到不同阳性细胞株。
3.确定阳性细胞株的乳腺所表达蛋白的差异性。
4.证明该基因打靶载体可用于山羊乳腺生长和分化的研究。
5.完成一篇包含项目总结、研究成果分析和意义的实验报告。
参考文献：
1.BaoquanChen,SandrineTruchet,AdrianaVella,MarkA.Fenwick,PierreChanvallon,LindaK.Petersen,JohnL.Waddington.(2016).High-efficiencytargetededitingoflargeviralgenomesbyRNA-guidednucleasesleadstorescueofinfectiousvirus.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,113(14),201528048.
2.Chun-QingSong,Zong-YangWang,Yu-ShanWang,ChaoJia,JianChen,Jun-JieZhang,Xiao-XingMa,Xiao-LinYang,Qiong-PingLiu.(2014).Targetedgenomemodificationofrice(oryzasativaL.)forfunctionalgenomicsusingCRISPR/Cas9.JournalofGeneticsandGenomics,41(7),397-405.
3.JuliaKönig,JanF.Leiberig,RyanJude,DevinTaylor,RyanS.Loyd,AndrewW.B.Smith,SiddharthKrishnan,ThomasE.Juenger,JonathanG.Monroe,NancyL.Rauhut.(2016).MaximizingmutagenesiswithsolubilizedCRISPR-Cas9ribonucleoproteincomplexes.Development,143(11),2025-2037.
4.Zheng-YiXu,BoZhang,HaoXue,PeiLiu,Zhang-XianChen,Jin-SongZhang,YixuanHou.(2016).CRISPR/Cas9-mediatedgenomeeditinginthefilamentousfungusfusariumgraminearum.FungalGeneticsandBiology,86,44-51.