抗体的纯化与检测详细.pptx

会计学怎么纯化我们想要的抗体？常见单抗的结构、种类、性质每个单抗等电点、电荷密度、疏水性、糖基化程度等生化性质各不相同。选择单抗的纯化方法，既要了解他们的共性，又要
了解个性，从而制定相应的纯化策略(下表3)。纯化步骤抗体纯化的步骤饱和硫酸铵沉淀法盐离子溶液2，操作步骤出去杂质透析袋
亲和层析是一种快速有效的生物活性物质的纯化方法,它通过偶联蛋白对目的蛋白选择性的吸收和分离,可取得较高的纯化效果,且操作简便,广泛地应用于实验室抗体纯化。由于产品价格昂贵,使用成本较高,限制了它的运用。
ProteinA
A蛋白是金黄色葡萄球菌的表面蛋白,分子量为42KD,有6个不同的IgG结合位点。其中有5个位点对IgG的Fc片段显示很强的特异性亲和力,不同的位点独立地与抗体结合。但IgA,IgM,IgE也可能结合在配体上,当达到饱和时,一个A蛋白分子至少可以结合两个IgG分子。A蛋白对IgG有高亲和力和特异性,这一特点使之非常适合用于纯化腹水或细胞培养上清中的单克隆抗体
ProteinG
G蛋白是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，一种三型Fc受体。其通过类似于A蛋白的非免疫机制与抗体的Fc段结合。像A蛋白一样，G蛋白与IgG的Fc区域特异性结合，不同的是，ProteinGSepharose还可以特异性低亲和地与重链的CH1及轻链的Cκ结合而用于纯化Fab及F(ab’)2。另外，ProteinG可以广泛、更强地结合许多类型的IgG，多克隆IgG及人IgG，同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配体脱落也相对更低。重链ProteinA-SepharoseCL2-4B亲和层析柱分离提纯IgG洗脱至洗脱峰回到基线后，使用上样缓冲液平衡柱子层析图及电泳结果AKTA蛋白纯化系统MabSelect系列——大规模抗体纯化亲和层析介质CaptoAdhere将MabselectSuRe和CaptoAdhere相结合进行两步层析纯化。MabselectSuRe可以达到>99%的抗体纯度，亲和洗脱峰使用Captoadhere的流穿模式进行精纯:使抗体分子流穿而聚集体、宿主蛋白、脱落的蛋白A配基等杂质结合在Adhere柱上加以去除。这样仅用两步层析就可以得到符合药用级质量要求的高纯度抗体产品，大大缩短了工艺时间，提高生产效率，同时增加了收率，降低了生产成本。方法：冻融浓缩法
原理：冻融处理后的样品，其溶质集中在浓缩管的下端，越近管底浓度越高单克隆抗体的检测//