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会计学主要内容高通量测序(High-throughputsequencing)又称“下一代”测序(“Next-generation”sequencing),可一次性对几百万到十亿条DNA分子进行并行测序; 可以对一个物种的基因组和转录组进行深入、细致和全貌的分析,所以又被称为深度测序(Deepsequencing)。 高通量测序的发展高通量测序的主要代表平台有: 罗氏的(Roche)的454测序仪(RocheGSFLXsequencer); Illumina的Solexa基因组分析仪(IlluminaGenomeAnalyzer); ABI的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer); ThermoFisher的离子半导体测序仪(IonSemiconductorsequencer).Illuminasolexa簇生成,模板变性桥式扩增并行合成测序法(SBS,Sequencing-By-Synthesis)和可逆性末端终止技术(ReversibleTerminatorChemistry)信号收集读取碱基序列测序通量测序通量 PCR产物纯化接头连接片段筛选样本混池克隆扩增不理想的扩增情况ISP富集(IonSphereParticalEnrichment)测序碱基识别IonTorrentPGM高通量测序全基因组测序基因组测序策略外显子组测序文库构建mRNA测序(mRNAseq)是指利用高通量测序技术对cDNA进行测序从而得到一个样品中基因表达、cSNP、全新的转录、全新异构体、剪接位点、等位基因特异性表达和罕见转录等最全面的转录组信息。文库构建LncRNA是一类长度超过200nt的长链非编码RNA,通过与DNA、RNA或蛋白质结合,在表观遗传、转录及转录后等水平调控基因表达。 lncRNA测序是研究已有参考基因组物种的特定组织或细胞在某个特定时期转录出的所有lncRNA和mRNA。 文库构建SmallRNA是长度约20-30nt的非编码RNA分子,主要包括miRNA、siRNA、piRNA等,是生命活动重要的调控因子,在基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等生理过程中起着重要的作用。文库构建CircRNA是mRNA在剪接的过程中,上游exon的5’端与下游exon的3’端剪接到一起,从而形成的首尾相接的环状RNA分子。 近年的研究表明,circRNA分子富含miRNA结合位点,在细胞中起到miRNA海绵的作用,进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用,升高靶基因的表达水平;这一作用机制被称为竞争性内源RNA(ceRNA)机制。 通过与疾病关联的miRNA相互作用,circRNA在疾病中发挥着重要的调控作用。 文库构建存在问题谢谢! &问题?高通量测序(High-throughputsequencing)又称“下一代”测序(“Next-generation”sequencing),可一次性对几百万到十亿条DNA分子进行并行测序; 可以对一个物种的基因组和转录组进行深入、细致和全貌的分析,所以又被称为深度测序(Deepsequencing)。 接头连接克隆扩增高通量测序基因组测序策略文库构建