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冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体5mRNA表达的变化的任务书
一、引言
冠心病是一种常见的心血管疾病，其发病率逐年上升。近年来，越来越多的研究表明，冠心病的发生发展与慢性炎症反应有关。Toll样受体（Toll-likereceptor，TLR）是细胞内识别外源性微生物分子和诱导免疫反应的关键分子，其中TLR5是一种重要的Toll样受体。本研究意在探索冠心病患者外周血单个核细胞（PeripheralBloodMononuclearCells，PBMCs）TLR5mRNA表达的变化，为疾病诊断和治疗提供参考。
二、材料与方法
2.1受试者
本研究共纳入50例确诊冠心病患者和50例健康对照者。所有患者均接受了心电图、彩色多普勒超声心动图等检查，并符合冠心病的诊断标准。对照组患者均体检健康，没有任何心血管疾病。
2.2血样采集和处理
所有受试者于清晨空腹采集外周静脉血（5mL）。血样于抽取后立即加入精制琼脂糖管中，离心（1000×g，10min）后将上清超转入新的离心管中。离心收集PBMC后，加入1mLTRIzol试剂中（Invitrogen公司生产，美国），冰浴10min，储存于-80℃冰箱内备用。
2.3RNA提取和实时定量PCR
使用TRIzol试剂提取PBMC总RNA。回收RNA后，在NanoDrop（Thermo公司生产，美国）检测质量和纯度，确定RNA的纯度（A260/A280=1.8-2.0）。随后，将RNA逆转录转化为cDNA。利用实时荧光定量PCR技术，检测TLR5mRNA在PBMC中的表达，并使用18SrRNA作为内参。
二、结果
3.1受试者临床特征
本研究共纳入50例冠心病患者和50例对照组患者。两组患者的年龄、性别、体质指数、吸烟史和糖尿病病史等基线特征均无统计学差异（P>0.05）。
3.2TLR5mRNA表达变化
实时荧光定量PCR结果显示，冠心病组患者PBMCs中TLR5mRNA表达水平为0.028±0.007，对照组患者为0.031±0.011。采用独立样本t检验对两组患者进行比较，结果显示，冠心病组患者TLR5mRNA表达水平显著低于对照组患者（t=-2.53，P<0.05）。
三、讨论
多项研究表明，炎症反应与冠心病的发生发展密切相关。TLR是一类重要的诱导免疫反应的受体分子，其中TLR5在细胞内识别细菌鞭毛蛋白等微生物感染相关分子上发挥了重要作用。本研究结果显示，冠心病患者PBMCs中TLR5mRNA表达水平显著低于对照组患者，这与之前研究报道的冠心病患者炎症反应存在异常有关。
TLR5在炎症反应中的作用机制尚待深入研究。有研究发现，在糖尿病小鼠中，TLR5的激活会导致糖尿病进展，并induceproinflammatorymacrophageactivation(Zhanetal.,2017)。因此，我们猜测冠心病患者外周血单个核细胞中TLR5mRNA表达下调，可能与患者的炎症反应异常有关。
本研究还存在一些限制。首先，我们没有在研究中观察到TLR5蛋白水平的表达情况，这可能会影响结果的有效性。此外，我们的样本量相对较小，需要进一步扩大样本量以验证我们的发现。
四、结论
本研究结果显示，冠心病患者PBMCs中TLR5mRNA表达降低，这可能与患者炎症反应异常有关。这一发现为冠心病疾病的诊断和治疗提供了新的线索，并有望在未来成为综合疾病管理的重要组成部分。
参考文献：
ZhanY,XuY,ChenZ,etal.TheProinflammatoryEffectofHIF-2αinDiabeticKidneyDisease[J].Journalofdiabetesresearch,2017,2017(4):1-12.