动脉粥样硬化斑块内血管新生与斑块稳定性及活血化瘀中药干预效应研究的任务书.docx

动脉粥样硬化斑块内血管新生与斑块稳定性及活血化瘀中药干预效应研究的任务书
一、研究背景和意义
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种慢性进行性疾病，其主要病理特征为斑块（plaque）形成和动脉内膜增厚。斑块内血管新生是AS进展和斑块不稳定性的主要原因之一。当斑块内缺氧状态加剧时，组织修复反应促进血管新生，随之增加血管通透性，使得血浆成分、炎症细胞、免疫细胞等容易进入斑块区域，加剧斑块的炎症反应和病理进展，较易破裂，从而引发心肌梗死、脑卒中等严重心血管事件。因此，探讨斑块内血管新生的相关机制和干预策略具有很高的临床价值。
传统中医认为，“瘀血为百病之源”，心血不畅、气滞血瘀是AS发生发展的主要因素之一。临床上常使用活血化瘀中药治疗AS，例如当归、桃仁、红花、川芎等。这类中药具有活血化瘀、促进斑块内微血管增生的作用，但具体机制尚不明确，且缺乏系统化的临床实验验证。本研究旨在探讨动脉粥样硬化斑块内血管新生与斑块稳定性的关系，研究活血化瘀中药干预的效应和机制，为AS的临床治疗提供有效的理论和实践依据。
二、研究方法和步骤
1.实验设计
本研究采用小鼠AS模型，随机分为AS组、活血化瘀组、对照组。每组10只小鼠。按照不同组别进行不同干预措施，记录斑块内血管密度、新生血管数量、斑块面积、炎症细胞浸润情况等指标的变化。使用多种方法研究干预后的效应及机制，包括组织学和免疫组织化学分析、RNA测序和基因表达分析、生物信息学分析、酶联免疫吸附实验和蛋白质组学分析等。
2.实验步骤
（1）建立小鼠AS模型。采用高胆固醇饮食和生长激素腹腔注射联合操作，制备AS模型小鼠。
（2）制备活血化瘀药物。挑选当归、桃仁、红花、川芎等中药材，按照一定比例制备中药水煎剂。
（3）小鼠实验。将小鼠分为AS组、活血化瘀组、对照组。AS组按照一定方案喂养，活血化瘀组和对照组喂养基础饮食，每日按照给药方案灌胃中药水煎剂或蒸馏水。记录实验期间小鼠的体质量和食物摄入量。分别在实验结束后2周和4周的时间点，分别淘汰3只小鼠，检测斑块内血管密度、新生血管数量、斑块面积、炎症细胞浸润等指标的变化。
（4）组织学和免疫组织化学分析。采用石蜡切片染色法和免疫组化染色法，观察斑块组织结构和细胞成分的变化。
（5）RNA测序和基因表达分析。从小鼠斑块组织中提取RNA，建立RNA文库，进行高通量测序和比较分析，筛选出差异有显著的基因，进行GeneOntology（GO）及KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes（KEGG）通路分析。
（6）生物信息学分析。对RNA测序及基因表达分析结果进行生物信息学分析，预测斑块内血管新生的可能机制及关键路径。
（7）酶联免疫吸附实验和蛋白质组学分析。从斑块组织中提取蛋白质，进行酶联免疫吸附实验和蛋白质组学分析，筛选出与血管新生相关的重要因子。
三、预期成果和意义
（1）本研究预期通过小鼠AS模型，观察斑块内血管新生对斑块稳定性的影响，探讨活血化瘀中药在防治AS过程中对斑块内微血管增生和稳定化的作用。
（2）预期揭示干预AS斑块内血管新生的致病机制和分子调控机制。
（3）预期构建AS斑块内血管新生的动态模型，为探索AS的发生机制和防治策略提供新思路和理论依据。
（4）预期为中西医结合、个体化调治AS提供新方法和可能的治疗方案。