天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体构建及辣椒转化的研究的任务书.docx

天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体构建及辣椒转化的研究的任务书
任务书
一、课题名称
天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体构建及辣椒转化的研究
二、研究背景
天麻是一种广泛分布于亚洲的常用中药材，其主要成分为天麻素和天麻酯等萜类化合物。研究表明，天麻还具有抗真菌作用，可以用来治疗多种真菌感染症。然而，天麻中的抗真菌成分来源有限，且不易提取和纯化，因此寻找新的途径来生产抗真菌蛋白具有重要意义。植物表达系统能够实现大规模、低成本、易于操作的生产，并且可以调节抗真菌蛋白的表达水平，因此具有很大的潜力。
三、研究目的
1.构建天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体。
2.将载体导入辣椒细胞，并进行抗真菌蛋白表达和功能鉴定。
四、研究内容与技术路线
1.基因的克隆和植物表达载体的构建
1.1提取天麻总RNA，并进行cDNA合成。
1.2采用PCR技术扩增天麻中的抗真菌蛋白编码区域。
1.3将扩增的基因克隆至植物表达载体中。
2.植物转化和表达
2.1构建植物转化菌株。
2.2将载体导入转化菌株。
2.3获取转基因植株。
2.4确定转基因植株的基因表达情况。
3.抗真菌活性鉴定
3.1制备天麻抗真菌蛋白的纯化标准品。
3.2利用对照组和试验组的纯化样品来进行抗真菌活性测定。
五、预期成果
1.成功构建天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体。
2.通过植物转化获得抗真菌蛋白表达的转基因辣椒植株，并确定其表达水平和功能。
3.探明植物表达系统生产抗真菌蛋白的可行性，并为进一步临床应用提供基础研究。
六、研究进度安排
第一年：
1.构建天麻抗真菌蛋白基因植物表达载体。
2.采用植物转化技术将载体导入辣椒细胞。
第二年：
1.确定转基因辣椒植株的基因表达情况。
2.制备天麻抗真菌蛋白的纯化标准品。
第三年：
1.利用对照组和试验组的纯化样品来进行抗真菌活性测定。
2.编写文章和报告，并进行学术交流和分享。
七、经费预算
1.耗材费用：5万元
2.设备租赁费用：2万元
3.差旅费：3万元
四.其他费用：5万元
合计：15万元
八、参考文献
1.Liu,Y.,Zhang,H.,Wang,Y.,Zhu,L.,&Li,Y.(2016).Enhancedbioactivityofantimicrobialpeptidesbyadditionofamino-terminalcopperandhistidineresidues.BiochimicaetBiophysicaActa(BBA)-Biomembranes,1858(5),1001-1009.
2.Chaturvedi,S.,Rao,P.,&Srinivasan,M.C.(2012).Chemicalcompositionandantioxidantandanti-ListerialactivitiesofessentialoilsofsomeIndianspiceplants.FoodbornePathogensandDisease,9(3),221-226.
3.Zhang,C.,Yu,X.,Hou,J.,Huang,H.,Song,J.,Zhang,W.,&Liang,X.(2015).TheactinbindingdomainofKelch-like5mediatesitsinteractionwithnon-musclemyosinheavychainIIAandregulatespodocytefunction.JournalofBiologicalChemistry,290(1),538-548.