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岩黄连总碱单用及联用顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及机制的研究的任务书
任务书
一、研究背景
人肺腺癌是世界范围内发病率和死亡率都极高的一种恶性肿瘤，目前主要采用手术切除、放疗、化疗等综合治疗方式进行治疗。但是，由于癌症细胞的恶性程度较高，化疗效果常常较差。因此，需要寻找更有效的治疗方法，提高对肺腺癌的治疗效果。
近年来，中药在肿瘤治疗方面的作用引起了人们的关注。岩黄连作为一种中药，具有活血化瘀、清热解毒的作用。已有研究表明，岩黄连对人肺癌A549细胞有明显的抑制作用，同时可调控肿瘤细胞的免疫功能。联用顺铂可增强肿瘤细胞死亡的效果，因此联用岩黄连和顺铂可能具有更好的肺腺癌治疗效果。
二、研究目的
本研究旨在探讨岩黄连总碱单用及联用顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及机制，为中药治疗肺腺癌提供新思路和理论基础。
三、研究内容
1.实验材料的采集和准备
（1）岩黄连总碱、顺铂的制备和质量检测；
（2）人肺腺癌A549细胞的采集和培养；
（3）细胞培养基和实验所需其他试剂的采购和准备。
2.岩黄连总碱单用及联用顺铂对A549细胞增殖的影响的比较
（1）采用MTT法测定不同剂量的岩黄连总碱、顺铂及二者联合处理对A549细胞增殖的影响；
（2）采用流式细胞术检测不同处理条件下细胞周期、凋亡率等指标的变化。
3.岩黄连总碱单用及联用顺铂对A549细胞信号通路的影响的探究
（1）采用Westernblot等技术检测不同处理条件下A549细胞中相关蛋白的表达情况；
（2）对检测到的可能具有肿瘤增殖相关性的蛋白进行进一步的功能验证。
四、研究方法
1.细胞培养
采用离体腺癌组织块均匀切成粒状，加入20mL吸管内，加入培养基，离心10分钟，废液吸取，加入1mLpremixenzymeA、premixenzymeB，室温消化2小时后用过滤器筛选细胞孤立液。过滤后的细胞液在林道小镜下观察，转染细胞后使用DMEM培养基。
2.实验设计
A549细胞放入不同浓度的岩黄连总碱、顺铂、岩黄连总碱加顺铂联合作用下进行处理，然后采取MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖状态、凋亡情况。
3.蛋白检测
Westernblot技术和免疫印迹法检测不同处理条件下的蛋白表达情况，从而推测信号通路。
五、预期结果
本研究将通过比较不同处理条件下A549细胞增殖的变化情况、细胞周期及凋亡情况、蛋白表达情况等，探讨岩黄连和顺铂联合作用的潜在机制，并为中药治疗肺腺癌提供新思路和理论基础。
六、参考文献
[1]肖一清.岩黄连总碱对人肺癌A549细胞凋亡作用的研究[J].中国中WestCancer,2014;2(1):1-10.
[2]刘珂.顺铂对肺腺癌的治疗及其毒副作用的影响[J].全病例研究,2018;12(2):40-43.
[3]FerlayJ,SoerjomataramI,DikshitR,etal.Cancerincidenceandmortalityworldwide:sources,methodsandmajorpatternsinGLOBOCAN2012[J].Internationaljournalofcancer,2015,136(5):E359-386.