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p53突变对肝癌恶性程度及抗癌药物耐受的影响研究的任务书
任务书
一、研究背景
肝癌是全球范围内发病率和死亡率居高不下的恶性肿瘤之一，尤其在亚洲地区，其死亡率仍然在不断增加。p53基因是一种典型的抑癌基因，它调控细胞的生长和凋亡，维持正常细胞周期和DNA修复系统的稳定性。然而，临床研究表明，p53基因突变在肝癌的发生和发展中发挥着重要的作用。p53基因突变不仅能够增加肝癌恶性程度，同时还会影响肝癌对化疗、放疗等综合治疗的敏感性和耐受性。因此，研究p53基因的突变情况对肝癌的诊断和治疗具有重要的临床意义。
二、研究目的和意义
本研究旨在探究p53基因突变对肝癌恶性程度及抗癌药物耐受的影响，具体目的如下：
1.分析p53基因突变在不同类型肝癌中的分布情况和频率，探究其与肝癌恶性程度的相关性。
2.比较p53基因突变肝癌与正常肝脏组织中细胞周期和DNA修复相关基因的表达情况，探究p53基因突变对肝癌细胞的影响机制。
3.研究不同p53基因突变类型对肝癌化疗抗药性的影响，尤其探究其是否与MDR基因家族的表达变化相关。
本研究将对肝癌相关基因的功能和机制进行深入探究，为肝癌的分类诊断和治疗提供更为全面的理论基础和临床指导，对提高肝癌治疗效果、降低病死率具有重要的意义。
三、研究内容和方法
1.研究对象
细胞系：HepG2、SMMC7721
肿瘤组织标本：来自X医院的肝癌患者标本20例、正常肝组织标本20例。
2.研究内容
2.1p53基因突变在不同肝癌类型中的分布和频率
通过测序技术对20例肝癌患者标本和正常肝组织标本进行基因突变检测和分析，比较不同肝癌类型中p53基因mutation频率的差异，通过多元回归法分析p53基因突变与肝癌恶性程度相关性。
2.2p53基因突变对肝癌细胞周期和DNA修复系统的影响
通过PCR方式检测p53基因突变类型，比较表达不同p53基因突变类型的肝癌细胞系与正常肝细胞的细胞周期和DNA修复相关基因表达差异。
2.3p53基因突变与化疗抗药性的关系
通过药敏实验、Westernblot技术检测不同p53基因突变类型肝癌细胞系对化疗药物的敏感性和MDR基因的表达差异。
3.研究方法
3.1基因突变检测
采用PCR和Sanger序列技术，检测p53基因的成对碱基替换、小片段插入/缺失以及插入/缺失式重复序列突变等多种类型的基因突变。
3.2细胞生长和增殖实验
MTT法检测不同p53基因突变类型肝癌细胞系对化疗药物敏感性，细胞增殖和细胞周期检测则采用流式细胞术（FACS）技术。
3.3分子生物学实验
Westernblot检测细胞中关键的表达和蛋白质修饰，将获得的数据进行定量和统计分析，判断p53基因突变与MDR基因家族表达之间的关系。
四、预期成果
本研究预期达到以下几个方面的成果：
1.了解不同肝癌类型中p53基因突变的分布和频率，明确突变类型与肝癌恶性程度的相关性。
2.通过比较p53基因突变肝癌与正常肝脏组织中细胞周期和DNA修复相关基因的表达情况，探究p53基因突变对肝癌细胞的影响机制。
3.研究不同p53基因突变类型对肝癌化疗抗药性的影响，尤其探究其是否与MDR基因家族的表达变化相关。
5.课题研究周期：12个月。
6.课题研究经费估算：本研究所需经费约为100万元，其中设备费用30万元，材料费用30万元，人员费用40万元。
注：以上人员费用包括研究生实验室维护费、实验动物养殖管理费、酶标仪维护费、实验耗材费和生物安全级别管理费等。