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应用酵母双杂交系统筛选与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质的任务书 任务书:应用酵母双杂交系统筛选与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质 背景 禽流感是一种由禽类感染的流感病毒引起的传染病,具有高度的传染性和致死率。禽流感病毒的核蛋白(NP)是病毒复制和转录中至关重要的因子。因此,研究禽流感病毒核蛋白的相互作用蛋白质对于探究禽流感的致病机制和防治具有重要意义。 任务描述 本任务旨在应用酵母双杂交系统筛选与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质。具体任务包括: 1.构建酵母双杂交系统。在酵母菌株中构建包含禽流感核蛋白的表达载体和激活子和受体结合的表达载体。通过转化和筛选,获得合适的酵母双杂交系统。 2.验证禽流感核蛋白的表达情况。通过PCR等方法检测转化后的酵母菌株中是否成功表达了禽流感核蛋白。 3.验证禽流感核蛋白与其他蛋白质的相互作用。将待筛选的蛋白质序列构建到酵母双杂交系统的表达载体中,并转化到酵母菌株中与禽流感核蛋白进行相互作用。通过筛选、鉴定和分析获得与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质。 4.分析相互作用蛋白质的生物功能。对筛选到的相互作用蛋白质进行生物学分析,探究其在禽流感的发病和治疗中的作用机制。 5.结果总结和论证。将本研究的结果与其他相关研究进行对比,提出禽流感研究以及禽流感防治的新思路和新方法。撰写报告进行总结和论证。 任务考核指标 本任务的考核指标包括: 1.酵母双杂交系统的建构和转化效率。酵母双杂交系统的构建和转化效率能够反映实验者的技术水平。 2.禽流感核蛋白在酵母菌株中的表达情况。通过PCR或其他方法检测禽流感核蛋白在酵母菌株中的表达情况能够反映实验者的实验操作技巧。 3.与禽流感核蛋白相互作用的蛋白质筛选效果。具有较高筛选效果的蛋白质为任务完成的重点。 4.相互作用蛋白质的生物学功能分析。对筛选到的蛋白质进行生物学功能分析和研究能够反映研究者研究的深度和广度。 5.结果总结和论证。撰写报告进行总结和论证,能够反映研究者对研究结果和学科领域的理解和思考能力。 参考文献 1.KatoA,etal.InfluenzaAvirusnucleoproteininteractswithcytoskeletonscaffoldingproteinalpha-actinin-4throughthenucleocapsid.JVirol.2012,86(5):2689-2701. 2.LuoX,etal.Endosomalmicroautophagy(eMI)playsanimportantroleintheentryofinfluenzaAvirus.Autophagy.2020,16(12):2326-2342. 3.LiW,etal.InfluenzaAvirusnucleoproteininducesapoptosisinhumanairwayepithelialcells:implicationsofanovelinteractionbetweennucleoproteinandhostproteinClusterin.CellDeath&Disease.2019,10(3):203. 4.LiW,etal.Label-freequantitativeproteomicsrevealsaclusterofelevatedproteinsininclusivebodiesfromH1N1influenza-infectedcells.JProteomeRes.2013,12(9):3799-3811. 5.XiaL,etal.InfluenzaAvirusexposurealterspyroptosisandapoptoticsignaling,leadingtocelldeathinahumanlungepithelialcellline.CellDeathDis.2021,12(3):260.