家蚕二氢硫辛酰胺脱氢酶基因的分子克隆及其鉴定的任务书.docx

家蚕二氢硫辛酰胺脱氢酶基因的分子克隆及其鉴定的任务书
任务书
课题名称：家蚕二氢硫辛酰胺脱氢酶基因的分子克隆及其鉴定
任务目的：
家蚕（Bombyxmori）是重要的经济昆虫，在纺织品和丝绸制造中具有重要的地位。二氢硫辛酰胺脱氢酶（dihydrolipoamidedehydrogenase，DLD）是三羧基酸循环、嫌氧呼吸和脂肪酸氧化过程中的一个重要的酶。它参与线粒体膜上的糖酵解和氧化磷酸化，同时也在线粒体氧化过程中担任辅因子的作用。此课题旨在通过分子克隆和鉴定家蚕DLD基因，为家蚕发育和生长的相关研究提供理论支持和实验基础。
任务内容：
1.设计DLD基因的引物，进行基因的PCR扩增和分子克隆。
2.利用测序仪进行DNA序列的测定，并进行序列分析。通过NCBI数据库进行BioEdit高分辨率序列编辑和BLAST序列同源性比对，以确定所克隆DLD基因的序列完整性和准确性。
3.对得到的家蚕DLD基因进行系统进化分析，比较其与其他物种的同源性，可利用MEGA5.0等生物信息学软件。
4.从家蚕不同组织、发育阶段和饲养条件的干扰实验中提取总RNA，利用RT-PCR技术对DLD基因进行差异表达分析，通过荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对不同的表达水平差异进行验证。
任务计划：
1.第一周
熟悉相关文献，完成基因引物的设计。制备必要的实验试剂和材料。
2.第二周
提取家蚕不同组织、发育阶段和饲养条件的干扰实验中的总RNA，进行RNA的纯化和定量。
3.第三周
通过RT-PCR技术对家蚕DLD基因进行扩增和克隆，将PCR产物进行电泳检验。
4.第四周
对PCR产物进行提取和测序，获得家蚕DLD基因的DNA序列。
5.第五周
利用NCBI数据库进行比对和BLAST分析，确定所得到的基因序列的完整性和准确性。
6.第六周
利用MEGA5.0等软件对家蚕DLD基因进行系统进化分析。
7.第七周
利用qRT-PCR技术对不同条件下DLD基因表达水平差异进行验证，并分析差异表达的可能原因。
8.第八周
对任务进行总结和报告。
参考文献：
1.GuptaRP,etal.MolecularcloningandsequencingofdihydrolipoamidedehydrogenasecDNAfromSilkworm,Bombyxmori.BiochemBiophysResCommun.2010,393(1):117-123.
2.KondoH,etal.Molecularcloning,functionalexpressionandcharacterizationofratdihydrolipoamidedehydrogenase.BiochimBiophysActa.1998,1387(2):241-252.
3.WangX,etal.MolecularcloningandsequenceanalysisofthecDNAencodingdihydrolipoamidedehydrogenasefromthesuckinglouse,Linognathusvituli(Acari:Phthiraptera).ExpApplAcarol.2010,50(3):199-209.