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中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2007,38(1)·45·

实验技术

如何建立高效液相色谱法测定有关物质的方法

谢沐风
(上海市药品检验所，上海200233)

摘要：论述了如何建立高效液相色谱法测定有关物质，阐述了方法中各条件确定的原理，并指出质量标准制订中存在的
一些问题。
关键词：高效液相色谱法；有关物质；测定；方法建立
中图分类号：TQ460.7+2；O657.7+2文献标识码：A文章编号：1001-8255(2007)01-0045-05

HowtoEstablishAHPLCMethodforDeterminationofRelatedSubstancesinDrugs

XIEMu-feng
(ShanghaiInstituteforDrugControl,Shanghai200233)

ABSTRACT:HowtoestablishaHPLCmethodfordeterminationofrelatedsubstancesindrugsisdiscussed.The
principlesofestablishmentofthechromatographicconditionsandsomeproblemsinthedrawingthequalitystandardof
drugsareexemplified.
KeyWords:HPLC;relatedsubstance;determination;methodestablishment

有关物质系药品中除主成分以外的杂质，它在贮藏、运输、使用过程中产生的降解产物等。由
可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试于有关物质的含量较少，所以选择专属性强、灵敏
剂、分解物、副产物、聚合体、异构体，以及不同度高、重现性好的检测方法至关重要。目前常用的
晶体、旋光异构的物质，也可能是制剂生产过程或方法有HPLC法和TLC法，后法已有讨论[1]。本研
究主要阐述HPLC法的建立过程。
收稿日期：2006-05-29
作者简介：谢沐风(1972)，男，硕士，从事新药复核和质量标准HPLC法检测有关物质的方法有：(1)杂质对照
的研究。品法(适用于已知杂质)；(2)主成分自身稀释对照
Tel：[phone]×26136
E-mail：[e-mail]法(适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取

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mAU40013.4本品经6个月的加速试验[(40±2)℃，相对湿度
()％)]与个月的长期留样考察[()℃，
300275±51225±2
相对湿度(60±10)％]，各有关物质与含量均未发生
2003
明显变化，表明本品在此条件下的贮存较稳定。
100

0参考文献：
051015
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t/min
1—1；2—中间体Ⅰ；3—中间体Ⅱ学进展,2003,27(3):188.
图31与中间体的混合溶液色谱图
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得其对照品，简称“自身对照法”)；(3)归一化法器超载等情况；若设定过低，则灵敏度不够，无法
(现已不多用)。前法为外标法、定量检测；后两法检测杂质及其含量变化。
均为限量检测。自身对照法又可分为加校正因子计最低检出浓度的测定可分为信噪比法和直接评
算和不加校正因子计算。目前，国内多采用后法。价法两种[3]。后法是目前较为科学的做法，即将仪
1色谱条件的确定器的灵敏度调至较适宜的值(仅对灵敏度可调节的
专属性是色谱条件建立的关键，通常是采用仪器而言，目前市场上主流品牌的液相色谱仪均已
在被测物对照品(或供试品)中加入适量的杂质或辅设定了一个恒定、较为灵敏的值)，然后将被测物
料，以验证所选色谱条件能否将各杂质与被测物溶液不断稀释后进样测定，直至被测物峰面积无法
分离检出[2]。应按1％(w/w)被测物浓度的各杂质量检出为止，此时的浓度即为最低检出浓度。
添加至被测物中，模拟被测物中可能存在杂质的最大进样量则是采用不断增加被测物溶液浓
状态，即有少量(约1％)杂质存在时能否与被测物度，直至峰严重拖尾、裂峰、柱超载和检测器超载
达到完全分离(分离度大于1.5)，以验证系统适用等情况出现。
性。只有这样才能较为客观、科学地反映被测物的根据最低检出浓度，采用“上推法”来确定
实际情况。而不应将被测物与各杂质配制成相同浓供试品溶液浓度：如一般设定杂质总量小于1.0％
度的溶液，因为实际检测中不可能存在这种情况，对照液，