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应用基因芯片技术研究非小细胞肺癌circRNAs表达谱特征的开题报告
摘要：
非小细胞肺癌(carcinomanon-smallcelllungcancer,NSCLC)是一种高发病率、高死亡率的恶性肿瘤，治疗难度大，复发率高。环形RNA(circularRNA，circRNA)是一种新型的RNA分子，其通过与微RNA、RNA结合蛋白等互作，从而参与了多种生物学过程。本文将探究NSCLC中circRNAs的表达谱特征及其在疾病发生、发展等方面的作用，应用基因芯片技术收集并分析circRNAs的表达，对NSCLC的治疗及预后提供新的思路。
关键词：非小细胞肺癌、circRNA、基因芯片、表达谱特征、作用
一、研究背景
肺癌是国内外普遍威胁人类健康的恶性肿瘤之一，而非小细胞肺癌是其中较为常见的一种。目前，尽管许多治疗手段已经出现，如手术、放疗、化疗以及靶向治疗等，但非小细胞肺癌治疗的效果并不理想，而且很容易复发，严重影响患者的生存期和生活质量。因此，对于非小细胞肺癌的研究和治疗仍然是医学界和科学家们持续关注的热点。
circRNA是一类新颖的非编码RNA分子，不同于线性RNA，circRNA的RNA末端相连，形成了闭环结构。circRNA具有一定的抗降解能力，其表达谱具有组织、细胞型和发育阶段特异性等，有可能成为NSCLC的生物标志，也为用于NSCLC的治疗提供了新的思路。因此，分析circRNA的特征和作用，对于进一步理解NSCLC的发生机制、预后及在抗癌治疗中的作用、提高对肺癌的治疗率和复发率的控制等具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在应用基因芯片技术探究NSCLC中circRNAs的表达谱特征及其在疾病发生、发展等方面的作用，为进一步研究NSCLC的分子机制提供新的思路和依据。
三、研究内容和方法
3.1研究内容
（1）构建NSCLC及正常胚胎肺组织circRNA文库；
（2）比较分析NSCLC及正常胚胎肺组织circRNA的表达谱特征；
（3）筛选并验证差异表达的circRNA，进一步探究其在NSCLC的作用和机制。
3.2研究方法
（1）收集NSCLC患者组织及正常胚胎肺组织样本，用TRIZOL方法提取总RNA；
（2）应用RnaseR和ActD剔除线性RNA和已知circRNA；
（3）构建文库，进行高通量测序，并过滤低质量序列；
（4）比较分析NSCLC及正常胚胎肺组织circRNA的表达谱特征，通过Deseq2R软件筛选差异表达的circRNA;
（5）筛选并验证差异表达的circRNA，检测其在肿瘤细胞中的表达情况，并用CRISPR-Cas9技术敲除差异表达的circRNA，比较敲除前后的细胞增殖情况；
（6）应用生物信息学分析，探究差异表达的circRNA的生物学功能及其参与的生物途径。
四、预期结果及意义
（1）探究NSCLC中circRNA的表达谱特征，筛选出与NSCLC相关的差异表达的circRNA；
（2）探究差异表达的circRNA的生物学功能及其参与的生物途径，揭示NSCLC的分子机制；
（3）为NSCLC的治疗提供新的治疗靶点；
（4）提高对肺癌的治疗率和复发率的控制，对于临床医生更好地制定个体化治疗方案具有重要意义。
总之，本研究将对NSCLC的治疗和预后等方面提供新的思路和依据，为解决NSCLC的临床难题提供新的靶点和策略，具有很大的现实和意义。