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1-磷酸鞘氨醇后适应对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用的任务书
任务书
1.选题背景
缺氧是引起各种疾病及器官功能受损的一个重要因素。在许多疾病中，缺氧所引起的内皮细胞受损是发病机理的重要环节。可见，对防治缺氧所造成的器官损伤有必要进行深入的研究。
近年来，研究表明，在脐血中含有一些生物活性分子，它通过血液灌注到受损组织中，能对组织的缺氧损伤产生保护修复作用。目前，以维生素E、核苷类物质、活性氧清除物、免疫调节物质等为代表的一些天然活性分子及其衍生物，作为新型抗氧化剂和细胞保护剂，在组织工程和再生医学方面正在被广泛应用。
磷酸鞘氨醇，是一种细胞膜的构成或代谢产物，是通过从细胞膜的磷脂酰肌醇(PI)而来，其控制着许多细胞的基本代谢过程。磷酸鞘氨醇在细胞中表现出了显著的细胞保护和抗氧化功能。尤其在维持生物膜功能方面起着至关重要的作用。因此，本次研究将探究磷酸鞘氨醇对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用。
2.研究目的
探究磷酸鞘氨醇后适应对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用，为深入研究细胞膜的构成或代谢产物的功能提供新的思路。
3.研究内容
3.1确定体外模型
选用人脐静脉内皮细胞(ECV-304)建立缺氧/氧再复氧模型。
3.2建立实验组和对照组
将人脐静脉内皮细胞随机分为对照组、模型组和磷酸鞘氨醇干预组。
3.3模型制备
取ECV-304细胞5000～1万个/L接种于96孔板内，一次性培养富氧24h，取出96孔板后在25℃、93%N2、5%CO2、2%O2和细胞惟一营养素和激素的特制缺氧培养设备内缺氧6h后，再在25℃、21%O2的细胞培养设备里复氧10h。对照组不经过缺氧处理。模型组和磷酸鞘氨醇干预组分别进行以上处理。
3.4实验操作
模型组和磷酸鞘氨醇干预组在模型制备后分别加入PBS(对照组亦添加)和不同浓度磷酸鞘氨醇，并分别进行培养48h，收集细胞进行下一步的实验操作。实验操作主要包括蛋白质表达和细胞形态观察。
3.5检测指标
3.5.1磷酸鞘氨醇对ECV-304细胞形态的影响
分别采用共聚焦显微镜和透射电镜对细胞形态进行观察，并进行图像分析。
3.5.2蛋白质表达
Westernblot法测定模型组和磷酸鞘氨醇干预组中VEGF、MMP-9和SPARC等相关蛋白质的表达水平。
4.预期成果
本研究将从细胞形态及蛋白质表达这两方面探究磷酸鞘氨醇后适应对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用，预期能够为细胞膜的构成或代谢产物的功能研究提供新的思路并推动相关的临床应用。
5.研究计划
本研究计划在2年内完成，具体内容如下：
1.前期准备(3个月)：
1.1熟悉实验操作内容、熟练掌握实验技能；
1.2收集并整理相关文献资料，确定研究方案。
2.实验操作(20个月)：
2.1确定体外模型，建立实验组和对照组；
2.2制备实验模型，进行实验操作；
2.3对实验结果进行综合性分析，总结实验结果并得出结论。
3.报告撰写(1个月)：
3.1撰写论文；
3.2组织展示设计。
6.参考文献
1.张彦川,曹云飞,陈瑞方,张丽娇.磷酸鞘氨醇对造血干细胞缺氧复氧启动损伤保护作用的研究.安徽医药科学,2011(4):425-426.
2.刘永华,郭文伟,高筱芳.磷酸鞘氨醇的生物学功能及其研究进展.中国实验方剂学杂志,2014(6):215-219.
3.隋颖,李冬梅,孙红慧,韩巧艳.磷酸鞘氨醇作用过程研究.细胞化学和细胞生物学,2013(1):8-14.