木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体的构建及农杆菌介导的遗传转化的任务书.docx

木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体的构建及农杆菌介导的遗传转化的任务书
任务书
一、任务背景
木薯是热带地区的一种重要食物作物，具有高产量、适应性强、易于种植等特点，被誉为“热带之王”。但同时，木薯还存在着一些缺陷，如其含有大量的“氢氰酸甙”，对人体健康有一定影响。因此，为了提高木薯的食用价值，降低其毒性，需要对木薯的基因进行研究。
近年来，利用RNA干扰技术进行基因沉默已成为基因功能研究的重要手段。本次任务旨在构建木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体，并通过农杆菌介导的遗传转化，将其导入木薯，实现对木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因的沉默，研究其对木薯淀粉合成的影响，为改良木薯品质提供理论和实验基础。
二、任务目标
1.构建木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体；
2.将RNA干扰载体构建到农杆菌介导质粒pCAMBIA1300中；
3.进行农杆菌介导的遗传转化；
4.验证RNA干扰载体是否能够成功沉默木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因；
5.研究沉默SBEⅠ、SBEⅡ基因对木薯淀粉合成的影响。
三、任务内容
1.任务一：构建木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体
（1）设计SBEⅠ、SBEⅡ基因的干扰片段序列；
（2）合成干扰片段，并接入RNA干扰载体；
（3）对RNA干扰载体进行序列分析和酶切鉴定。
2.任务二：将RNA干扰载体构建到农杆菌介导质粒pCAMBIA1300中
（1）将RNA干扰载体和质粒pCAMBIA1300进行酶切和连接；
（2）对重组质粒进行验证。
3.任务三：进行农杆菌介导的遗传转化
（1）制备木薯愈伤组织；
（2）利用农杆菌将RNA干扰载体导入木薯愈伤组织中；
（3）筛选转化阳性的愈伤组织。
4.任务四：验证RNA干扰载体是否能够成功沉默木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因
（1）提取RNA；
（2）利用qPCR检测SBEⅠ、SBEⅡ基因表达水平。
5.任务五：研究沉默SBEⅠ、SBEⅡ基因对木薯淀粉合成的影响
（1）对转化阳性的愈伤组织和野生型愈伤组织进行淀粉含量测定；
（2）对转化阳性的愈伤组织和野生型愈伤组织进行淀粉分子量分布分析。
四、任务成果
1.构建成功的SBEⅠ、SBEⅡ基因RNA干扰载体；
2.成功将RNA干扰载体构建到农杆菌介导质粒pCAMBIA1300中；
3.成功进行农杆菌介导的遗传转化；
4.验证SBEⅠ、SBEⅡ基因沉默的达成；
5.研究沉默SBEⅠ、SBEⅡ基因对木薯淀粉合成的影响，并得出可靠的数据和结论。
五、参考文献
1.林元芳,王荣,杨思旸,等.木薯SBEⅠ、SBEⅡ基因克隆及功能分析[J].科技视界,2018,(2):28-29.
2.张云飞,李志滨,王春霞,等.农杆菌介导遗传转化技术及其应用[J].福建农学院学报,2015,(2):143-147.
3.王其新,胡灵汐,王强,等.RNA干扰及其在植物分子生物学研究中的应用[J].生命科学仪器,2014,(4):33-35.