小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响的任务书.docx

小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响的任务书
任务：探究小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响
摘要：
RegIα基因是一种胃泌液中的重要因子，与胃癌发生和发展密切相关。本文旨在探究小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响，采用脂质体介导的siRNA转染技术将siRNA分别转染入高表达RegIα基因的胃癌细胞株，并进行细胞增殖实验，结果发现，siRNA转染后细胞增殖能力降低，细胞活性也显著降低，同时，RNA干扰还可抑制RegIα基因的表达，说明RNA干扰可有效抑制高表达RegIα基因胃癌细胞株的增殖。
关键词：小RNA干扰；RegIα基因；胃癌细胞株；增殖
Abstract：
RegIαgeneisanimportantfactoringastricsecretion,whichiscloselyrelatedtotheoccurrenceanddevelopmentofgastriccancer.ThispaperaimstoinvestigatetheeffectofsmallRNAinterferenceontheproliferationofgastriccancercelllinewithhighexpressionofRegIαgene.Liposome-mediatedsiRNAtransfectiontechnologywasusedtotransfectedsiRNAintogastriccancercelllinewithhighexpressionofRegIαgene,andcellproliferationexperimentwascarriedout.TheresultsshowedthatcellproliferationabilityandcellactivityweresignificantlydecreasedaftersiRNAtransfection,andRNAinterferencecouldalsoinhibittheexpressionofRegIαgene.ThissuggeststhatRNAinterferencecaneffectivelyinhibittheproliferationofgastriccancercelllinewithhighexpressionofRegIαgene.
Keywords:smallRNAinterference;RegIαgene;gastriccancercellline;proliferation
正文：
胃癌是危及人类健康的常见恶性肿瘤之一，其发生机制非常复杂，其生长和转移能力主要取决于某些特定因素的调节。RegIα基因是一种胃泌液中的重要因子，对胃癌的发生和发展有着重要的作用。
RegIα基因是一种高度保守的小分子胃泌液生长因子，是胃窦和胃冠区的主要上皮细胞中的一个积累物质。RegIα基因的唯一性主要在于其表达的部位及表达的量，它的表达随着胃黏膜受伤的程度而增加，尤其是在胃癌和胃溃疡的患者中RegIα基因的表达水平非常高。
小RNA干扰是一种常用的基因沉默技术，可通过siRNA、shRNA等方法诱导RNA降解，达到抑制基因表达的目的。因此，本文采用小RNA干扰技术，针对高表达RegIα基因的胃癌细胞株，探究小RNA干扰对其增殖的影响。
材料与方法：
实验组分为对照组和干扰组，对照组为未进行任何处理的胃癌细胞，干扰组先进行RegIα基因表达的检测，然后进行siRNA干扰。
1.细胞培养
选取高表达RegIα基因的胃癌细胞株作为研究对象，将细胞放在含10%FBS的完整培养基中培养，温度为37°C，环境湿度为5%CO2。
2.siRNA转染
采用脂质体介导的siRNA转染技术，将siRNA转染到高表达RegIα基因的胃癌细胞中。转染质量为200ng/孔，转染后细胞孔密度为2x10^5/ml，转染后细胞放回培养瓶中，继续进行培养。
3.检测RegIα的表达
利用RT-PCR和Westernblot方法检测RegIα基因的表达水平，检测转染前后的RegIα基因表达。
4.细胞增殖实验
选取转染后48h时点，使用MTT法检测细胞增殖情况，添加20μlMTT溶液到每个孔中后，再孵育4h，加入200μlDMSO液即可溶解细胞中的结晶，测定吸光度值。
结果：
1.效果验证：
在对干扰组转染效果的验证中，发现69%的细胞经过siRNA转染后，RegIα基因的表达被有效抑制，且转染后细胞的颜色也发生了明显的变化。
2.小RNA干扰对胃癌细胞株增殖的影响：
通过细胞增殖实验发现，siRNA转染后，细胞增殖明显受到抑制，细胞活性也显著降低，说明小RNA干扰可抑制高表达RegIα基因胃癌细胞株的增殖。
讨论