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沙门菌PCR检测方法的建立及其初步应用的任务书
任务书
题目：沙门菌PCR检测方法的建立及其初步应用
引言：
沙门菌是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性细菌，可引起人和动物的食物中毒和伤寒病等。传统的检测方法主要基于细菌培养，并重复检测，检测时间较长且存在误差。因此，建立一种快速、可靠的检测方法对于保障食品安全起到了重要作用。本项目以PCR技术为基础，旨在建立沙门菌的快速检测方法，并在食品中应用。
任务目标：
1.建立一种快速、简便、准确、可靠的沙门菌PCR检测方法。
2.应用该方法对实际食品样品进行检测，验证其可行性。
任务分析：
1.建立PCR检测方法
PCR技术是一种快速、敏感、特异性高、检测限低、显著经济的检测方法。通过PCR法扩增沙门菌特异DNA序列，在质粒或酵母中表达外源蛋白，获得外源蛋白。首先需要提取样品中的DNA，进行PCR扩增检测。建立该方法的关键在于选择是选得适用于沙门菌的引物、优化反应系统、反应体系中的每个成分配比、PCR条件的确定和优化。在确定了优化的反应体系，检测方法可以进一步的验证方法的特异性和灵敏性。如果方法建立成功，进一步优化PCR体系可以通过改变PCR体系温度梯度、试剂配比等因素来提高检测灵敏度。
2.对实际样品进行验证
建立方法后，需要对实际食品样品进行检测，包括鸡蛋和蔬菜等常见沙门菌污染源。根据样品特性的不同，还需对提取的DNA进行质控、纯化、浓缩等处理。比较多种提取方法的优缺点，确定最适宜的提取方法。处理完成后，对样品中进行沙门菌的PCR检测，以验证方法的可行性。
任务计划：
第一阶段（1-2周）
1.确定PCR扩增的引物和探针；
2.优化PCR反应条件；
3.建立沙门菌质粒或酵母表达载体，获得外源蛋白；
第二阶段（3-4周）
4.检测PCR方法的特异性和灵敏度，确定最佳PCR条件；
5.应用该检测方法分别对蔬菜和鸡蛋等食品进行沙门菌的检测，比对并验证该方法的准确度；
第三阶段（5-6周）
6.优化检测方法，提高其检测敏感性和物理化学特性；
7.完成研究报告，撰写论文，准备学术交流会的PPT。
参考文献：
1.Li,B.,Pan,D.,Liang,X.,Liang,Y.,He,Q.,Wang,Y.,&Xia,X.(2017).DesignandapplicationofaSalmonellaspp.Targetedoligonucleotidemicroarrayforfoodsafety.Foodmicrobiology,63,139-145.
2.LeHello,S.,Hendriksen,R.S.,Doublet,B.,Fisher,I.,Nielsen,E.M.,Whichard,J.M.,...&Nielsen,N.L.(2011).InternationalspreadofanepidemicpopulationofSalmonellaentericaserotypeKentuckyST198resistanttociprofloxacin.JournalofInfectiousDiseases,204(5),675-684.
3.Mu,X.,Hao,Y.,Gao,A.,Zhang,Y.,Wang,D.,Lv,X.,&Yang,H.(2020).EvaluationofmultiplePCRtargetsforthedetectionofSalmonellafromfoodproducts.JournalofFoodSafety,e12730.