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慢性粒细胞白血病中BCR-ABL调控Survivin机制的初步研究的开题报告
1.研究背景和意义
慢性粒细胞白血病(ChronicMyeloidLeukemia,CML)是一种起源于骨髓干细胞的克隆性嗜粒细胞增生性疾病，BCR-ABL基因患者占CML患者的95%以上。Survivin是一种抗凋亡蛋白，常常在肿瘤细胞中表达，与肿瘤的恶性程度相关。此前的研究表明，BCR-ABL可以通过调节Survivin的表达来影响CML细胞攻击和生存能力。因此，研究BCR-ABL如何调节Survivin的表达将有助于深入了解CML的发病机制，为治疗CML提供理论基础。
2.研究内容
本研究拟通过实验验证BCR-ABL调节Survivin的表达，并探究此调节机制是否涉及到微小RNA(MicroRNA，miRNA)的参与。具体研究内容如下：
1）利用qRT-PCR和Westernblot等方法，检测BCR-ABL和Survivin在CML细胞系K562中的表达情况，进一步验证BCR-ABL是否调节Survivin的表达。
2）通过miRNA靶点预测软件筛选出与Survivin表达相关的miRNA，采用qRT-PCR方法检测这些miRNA在K562细胞中的表达情况，确定其与Survivin的关系。
3）采用miRNA共转染和Ago2RIP技术，探究miRNA是否通过结合Argonaute2(Ago2)蛋白而参与到BCR-ABL调控Survivin的表达中。
3.研究方法和技术路线
1）细胞培养和转染：将K562细胞分为对照组和转染组，转染mu-bcr-abl质粒和相关miRNAmimics/inhibitors。
2）qRT-PCR和Westernblot：以RNA和蛋白质为样品，检测细胞中BCR-ABL和Survivin的表达水平。
3）miRNA靶点预测：针对Survivin基因，筛选出可能影响其表达的miRNA，确定它们与Survivin的作用方式，进一步确定miRNA与BCR-ABL调控Survivin表达的关系。
4）miRNA共转染和Ago2RIP：利用共转染和Ago2RIP技术，检测miRNA与Ago2的结合情况以及它们是否与Survivin的mRNA结合。
4.预期结果和意义
我们预计本研究可以明确BCR-ABL调节Survivin表达的调控机制，并从miRNA这个角度来了解Survivin表达过程中的转录后调控。此外，本研究还将为CML治疗新靶点的发现和开发提供基础理论。