草鱼呼肠孤病毒核衣壳蛋白VP6的表达及生物学特性研究的中期报告.docx

草鱼呼肠孤病毒核衣壳蛋白VP6的表达及生物学特性研究的中期报告
中期报告
1.研究背景
草鱼呼肠孤病毒是一种影响草鱼、鲢等鱼类的病毒，目前还没有特效的防治方法。该病毒的核衣壳蛋白VP6是该病毒的重要成分，能激发宿主免疫反应，具有重要的生物学意义。因此，本文对草鱼呼肠孤病毒核衣壳蛋白VP6的表达及生物学特性进行研究，旨在深入了解该病毒的致病机制，为草鱼呼肠孤病毒的防治提供一定的参考。
2.研究方法
(1)分离、纯化草鱼呼肠孤病毒
从患病的草鱼体内分离病毒，采用离心、超声波、聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE对病毒进行纯化。
(2)克隆VP6基因
利用RTPCR反转录草鱼呼肠孤病毒RNA，扩增VP6基因片段，将PCR产物克隆到表达载体中。
(3)表达VP6蛋白
将克隆的VP6基因转染到293T细胞中，通过Westernblot分析检测良好的亚细胞克隆。
(4)鉴定VP6蛋白
通过酵母两杂交、GST拉毛和Far-Western分析等技术对VP6蛋白的互作分析，检测VP6和宿主免疫分子之间的互作。
(5)对VP6蛋白进行免疫原性分析
抗体检测和流式细胞术分析，确定VP6蛋白的免疫原性特点。
3.报告成果
(1)成功分离、纯化草鱼呼肠孤病毒
通过离心、超声波、聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE对草鱼呼肠孤病毒进行了纯化。经过实验室检测，纯化效果非常好。
(2)成功克隆了VP6基因
利用RTPCR从草鱼呼肠孤病毒RNA中扩增了VP6基因片段，然后将PCR产物克隆到表达载体中。
(3)成功表达VP6蛋白
将克隆的VP6基因转染到293T细胞中，通过Westernblot分析检测良好的亚细胞克隆。
(4)成功鉴定VP6蛋白
通过酵母两杂交、GST拉毛和Far-Western分析等技术对VP6蛋白的互作分析，检测VP6和宿主免疫分子之间的互作。
(5)对VP6蛋白进行了免疫原性分析
抗体检测和流式细胞术分析，确定VP6蛋白的免疫原性特点。检测的结果表明，VP6蛋白具有较好的免疫原性。
4.下一步工作
(1)进一步对VP6蛋白的生物学特性进行研究
(2)确定VP6蛋白的免疫学特性
(3)研究VP6蛋白在草鱼生命周期中的作用