应用巴斯德毕赤酵母表达重组人TFPI的综述报告.docx

应用巴斯德毕赤酵母表达重组人TFPI的综述报告
引言：
TFPI（组织因子途径抑制剂）是一种由组织因子途径引起血凝的负反馈调节者，它为代表性的血液病理学调节者之一。自从1985年第一次成功地分离它以来，TFPI已经成为一种具有重要理论和实际意义的研究对象。然而，TFPI的生产以及其生物学功能相关研究，具有一定的困难性。巴斯德毕赤酵母表达系统可以被用于解决这些问题。
本篇综述报告将重点介绍使用巴斯德毕赤酵母表达重组人TFPI的优点和应用。
1、巴斯德毕赤酵母表达系统简介
Pichiapastoris是一种能够高度表达外源蛋白的酵母。它的表达量比常见的大肠杆菌和酵母表达系统更高。P.pastoris具有多个优势，如强大的转录解调、异位蛋白质到高浓度的特异性表达能力、高度紧张的代谢调控和较高水平的转录/翻译后修饰。
2、巴斯德毕赤酵母表达系统应用于重组人TFPI的研究
2.1构建重组质粒和巴斯德毕赤酵母转染
如：Joyce在1996年首次给出了pPIC3.5K-TFPI的构建和原核型电转的详细策略。开发了一个高效、经济、高质量的表达系统，可表达出分子质量大约为40kDa的重组人TFPI。
2.2重组人TFPI的分离与纯化
巴斯德毕赤酵母表达的重组人TFPI进行了一系列的纯化，在固态硫酸铵分级沉淀后继续经过柱层析纯化，利用酸性洗脱，经过磷酸钠缓冲液再经过SephacrylS-100为末级纯化。通过Pamelaetal.的研究表明，TFPI无需进行那些很烦琐的纯化分离，应用巴斯德毕赤酵母表达系统即能表达出大量TFPI的原生态形式，发现TFPI在其原来的细胞状态中高效地在异丙醇中解离，即从细胞的内膜-核质界面中解离，并无需特定步骤的纯化。
2.3重组TFPI功能鉴定方法
重组人TFPI是需要特殊鉴定的，大多数的方法框架主要有：一个是放射酶免疫分析（RIA），另外就是计算酵素联合免疫分析（ELISA）。阳性蛋白的定量分离和检测可以用信号荧光成像。
3、结论
总体而言，巴斯德毕赤酵母表达重组人TFPI具有高效、经济、高质量的表达系统的特点，已成为一种非常有前景的表达系统。它在表达重组人TFPI和其他生物学物质方面具有优越的性能，是发展快速、方便高效的表达系统的利器。