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基于转基因RNAi抑制家蚕杆状病毒增殖研究的中期报告 本研究旨在探究基于转基因RNAi技术抑制家蚕杆状病毒(BmNPV)增殖的可行性。本次报告将介绍研究的进展情况及未来计划。 研究进展: 1.构建了转基因RNAi载体 通过PCR扩增运用了蚕丝蛋白基因抑制因子BmSPIF和BmNAT1,并插入miRNA遗传子。这些miRNA遗传子编码的小RNA会在细胞内与相应的C端RNA酶Ⅲ(Dicer)相互作用,从而产生短的mRNA中间分子。这些分子会与RISC相互作用,并与具有相应miRNA连锁的mRNA特异性结合。通过这种方式,蚕丝蛋白基因抑制因子BmSPIF和BmNAT1会被RNAi诱导剪切,从而实现RNAi作用。 2.构建了表达BmNPVRNA1的细胞系 向Bm5细胞系中转染了表达BmNPVRNA1的质粒,以表达BmNPVRNA1,从而获得了国内家蚕体内感染BmNPV的模拟细胞系。 3.验证了RNAi抑制BmNPV的效果 将构建的转基因RNAi载体转染到表达BmNPVRNA1的细胞系中,并进行了荧光定量PCR分析和蛋白质印迹分析。结果显示,BmSPIF和BmNAT1的mRNA表达水平均明显下降。同时,BmNPV的mRNA表达水平和蛋白质表达水平也均明显下降。 未来计划: 1.优化转染条件 目前的转染条件需要进一步优化,以获得更好的表达效果。 2.进一步验证重要基因的RNAi效果 除了BmSPIF和BmNAT1以外,还需要对一些BmNPV增殖所必需的基因进行RNAi实验,以验证RNAi技术对BmNPV增殖的抑制作用。 3.研究RNAi抑制BmNPV在实际应用中的可行性 在探究RNAi技术抑制BmNPV增殖的基础上,还需要探究该技术在实际应用中的可行性与应用效果。 结论: 本研究证实了基于转基因RNAi技术可以抑制家蚕杆状病毒增殖,为进一步研究寻找家蚕病毒的控制方法提供了思路。