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利用农杆菌介导的幼穗法将水稻OsDREB2.2基因导入小麦的研究的中期报告 该研究旨在将水稻OsDREB2.2基因导入小麦,以提高小麦对逆境的抵抗力。中期报告如下: 1.筛选水稻OsDREB2.2基因 通过水稻转录组数据,我们筛选出表达水稻OsDREB2.2基因的组织,以及在逆境胁迫下,OsDREB2.2基因表达变化的组织。进一步通过qRT-PCR验证,确定OsDREB2.2基因在水稻幼穗中表达量最高,且在高盐和低温胁迫下表达水平明显上调。 2.构建植物表达载体 我们利用PCR技术扩增OsDREB2.2基因,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中,将得到的重组质粒pCAMBIA1301-OsDREB2.2通过电转化法导入大肠杆菌DH5α中,进行测序验证。结果表明,质粒成功构建。 3.优化小麦愈伤组织培养条件 我们将小麦愈伤组织接种在不同浓度的植物生长素(2,4-D)和愈伤组织培养基中,并优化了诱导愈伤组织和子叶愈伤组织的条件。同时优化了愈伤组织的转化条件及筛选标识的方法,以保证后续基因转化的成功率。 4.构建农杆菌介导的基因转化体系 将pCAMBIA1301-OsDREB2.2载体转化到农杆菌EHA105中,通过杆菌法将该杆菌介导到小麦愈伤组织中,成功构建了农杆菌介导的基因转化体系。初步筛选得到多个表达OsDREB2.2基因的转化植株,经PCR验证,表明基因成功整合到小麦愈伤组织中。 总结:通过以上过程,我们成功地筛选出表达OsDREB2.2基因的逆境组织,成功构建了植物表达载体并优化了基因转化体系。下一步将进一步鉴定和筛选,以获得稳定和高效表达OsDREB2.2基因的小麦转基因植株。