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嗜线虫致病杆菌几丁质酶基因原核表达及生物活性研究的中期报告
嗜线虫致病杆菌是一种致病性强的细菌，能够引起动物的肠炎和败血症，给畜牧业和水产养殖业带来很大的经济损失。几丁质酶是一种广泛应用于水产养殖、食品加工等领域的酶类，是分解几丁质的主要酶类。本研究旨在通过原核表达和生物活性研究，获取嗜线虫致病杆菌几丁质酶基因的相关信息。
实验流程：
1.利用PCR方法扩增获得嗜线虫致病杆菌Chitinase基因片段。
2.将扩增得到的基因片段克隆到原核表达载体pET32a(+)中。
3.利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行原核表达，并通过SDS-PAGE和Westernblot检测表达情况。
4.利用超声波破碎和螺旋柱层析技术制备重组几丁质酶。
5.对重组几丁质酶的活性进行测定。
实验结果：
1.成功扩增到了嗜线虫致病杆菌几丁质酶基因片段，长度为1170bp。
2.经PCR扩增后，成功将基因片段插入原核表达载体pET32a(+)中，构建了重组质粒pET32a-Chitinase。
3.经SDS-PAGE和Westernblot检测，表达出了目的蛋白，其相对分子质量约为53kDa。
4.利用螺旋柱层析技术制备了重组几丁质酶，并成功得到了纯化的重组酶。
5.利用几丁质为底物，对重组几丁质酶的酶活进行测定，其酶活约为5.12U/mg。
结论：
本研究成功获得了嗜线虫致病杆菌几丁质酶基因的原核表达载体，成功表达出了目的蛋白，并且通过螺旋柱层析技术制备了纯化的重组几丁质酶。同时，对重组几丁质酶进行了酶活测定，结果表明其具有一定的酶活性，为后续研究提供了重要支持。