传染性法氏囊病病毒VP4蛋白抗体ELISA检测方法研究的中期报告.docx

传染性法氏囊病病毒VP4蛋白抗体ELISA检测方法研究的中期报告
本研究旨在开发一种传染性法氏囊病病毒VP4蛋白抗体ELISA检测方法。
材料和方法：
1.实验室制备的VP4蛋白质，纯度>90％。
2.从法氏囊病病毒感染的鸡血清中制备抗体。
3.已知感染状态的阳性和阴性鸡血清10个样品。
4.塑料小孔板（96孔）。
5.洗板缓冲液（PBST：0.1％Tween20/PBSpH7.4）
6.1％牛乳粉/TBST缓冲液pH7.4
7.酶联试剂（HRP标记的抗鸡IgY抗体）。
步骤：
1.在小孔板中吸附VP4蛋白1ug/mL在PBS中，4°C过夜。
2.用PBST洗板4次。
3.用1％牛乳粉缓冲液封闭孔3小时。
4.用PBST洗板4次。
5.加入100μL的样品（血清120倍稀释）和100μL1：1000稀释的酶联试剂。
6.在37°C下孵育1小时。
7.6次用PBST洗板。
8.加入100μL的TMB显色底物。
9.10分钟后，停止反应，加入1MH2SO4停止反应。
10.测量A450nm。
结果：
1.阳性和阴性鸡血清和玉米植株中未检测到任何非特异性结果。
2.具有良好的灵敏度和特异性。
结论：
本研究成功地开发了一种传染性法氏囊病病毒VP4蛋白抗体ELISA检测方法，具有良好的灵敏度和特异性。未来将进一步分析其应用于大规模动物监测的可能性。