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核辅阻遏物NCoR和SMRT在斑马鱼前后轴建立和血液发生中的作用机制研究的开题报告 研究背景: 前后轴建立是动物胚胎发育的重要过程,在该过程中细胞极性的确立无疑是一个关键步骤。细胞极性的建立包括蛋白质分布和细胞内外信号的调控,其中转录因子的调控也是很重要的一环。核辅阻遏物(Nuclearreceptorcorepressor,NCoR)与核受体互作,调控转录因子的转录活性,在多个基因表达中发挥重要作用。而SMRT(silencingmediatorforretinoidandthyroidhormonereceptors)是另一个与NCoR具有相似功能的蛋白质。在斑马鱼中,NCoR和SMRT的调控作用在前后轴建立和血液发生等方面很重要,但其分子机制尚未被彻底研究。 研究目的: 本研究旨在探讨NCoR和SMRT在斑马鱼前后轴建立和血液发生中的作用机制,判断NCoR和SMRT对胚胎发育和血液发生的影响,并分析其在斑马鱼前后轴建立过程中的作用。 研究方法: 1.分别使用NCoR和SMRT突变体及免疫组化技术鉴定它们在斑马鱼早期胚胎发育中的表达情况; 2.利用insitu杂交试验研究NCoR和SMRT在斑马鱼早期胚胎发育和血液发生过程中的信号传导; 3.使用RNAi技术对NCoR和SMRT的表达进行干扰,研究它们对斑马鱼胚胎发育和血液发生的影响; 4.利用Westernblot和RT-PCR技术评估NCoR和SMRT突变体的蛋白质表达和转录水平的变化情况; 5.利用药物抑制对NCoR和SMRT的调控作用进行研究,分析其在斑马鱼前后轴建立和血液发生中的作用。 预期结果: 1.通过免疫组化技术和insitu杂交试验,初步确定NCoR和SMRT在斑马鱼早期胚胎发育和血液发生中的表达情况及信号传导途径; 2.通过RNAi技术对NCoR和SMRT的表达进行干扰,评估它们对斑马鱼胚胎发育和血液发生的影响; 3.通过Westernblot和RT-PCR技术,分析NCoR和SMRT突变体的蛋白质表达和转录水平变化情况; 4.结合药物抑制的实验结果,进一步明确NCoR和SMRT在斑马鱼前后轴建立和血液发生中的作用机制。 研究意义: 该研究将有助于深入了解NCoR和SMRT在斑马鱼前后轴建立和血液发生中的作用机制,进而为更深入研究斑马鱼早期胚胎发育、胚胎干细胞分化、信号通路调节提供新的思路和方法。此外,该研究对于更好地理解细胞极性的发生和疾病相关因子的研究也具有一定的启示作用。