进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒素检验方法（征求意见稿）.doc

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出入境检验检疫行业标准
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进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素的检验方法
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MethodforthedeterminationofClostridiumbotulinumandbotulinumtoxininfoodsforimportandexport     
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等同采用AOACOfficialMethod977.26
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XX发布
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XX实施
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前  言
本标准是是对SN/T0865-2000《进出口食品中的肉毒梭菌和肉毒毒素的检验方法》进行修订。
本标准与SN/T0865-2000相比主要修改如下：
——按照GB/T1。1-2000对标准文本格式和文字进行修改。
——增加了关于分子生物检测和ELISA检测的说明
——增加方法检测流程图
----增加了毒素分型检测部分。
----增加了有关安全防护的说明
本标准国家质量监督检验检疫局提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:朱金国等。
本标准于1984年首次发布，2000年第一次修订，本次为第二次修订。

进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素的检验方法
范围
本标准规定了进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素的检验方法。
本标准适合于食品及其原料中的肉毒梭菌及其肉毒毒素的检验，有专门规定的检验方法除外。
规范性引用文件
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使甩下列标准最新版本的可能性。
GB4789.26食品卫生微生物学检验罐头食品商业无菌的检验
SN0330—1994出口食品中微生物学检验通则
公职分析化学家协会(AOAC)官方分析方法(2005)食品中的肉毒梭菌及其毒素（微生物学方法)[AOACOfficialMethodsofAnalysis，18thEdition(2005)977.26;ClostridiumBotulinumandItsToxinsinFoods(MicrobiologicalMethod)]
U.S．FoodandDrugAdministration:BacteriologicalAnalyticalManual（BAM）Chapter17ClostridiumbotulinumBAM
定义
本标准采用下列定义。
肉毒梭菌clostridiumbotulinum
一种专性厌氧生长并产生芽胞的革兰氏阳性杆菌，属厌氧性梭状芽胞杆菌属，在适宜的培养基及特定的环境条件下产生肉毒毒素。
肉毒毒素botulinumtoxin
由肉毒梭菌产生的多类型的高分子不耐热蛋白质，为一类对人类、高等哺乳动物和鱼类都具有很强毒性的神经麻痹毒素。
原理
当肉毒毒素与相应的抗毒素混合后，发生特异性结合，致使毒素的毒性全被抗毒素中和而失去毒力。以含有大于1个小白鼠最小致死量(MLD)的肉毒毒素的食品或培养物的提取液，注射于小白鼠腹腔内，在出现肉毒中毒症状之后，于48h内死亡。相应的抗毒素能中和肉毒毒素并能保护小白鼠免于出现症状，而其他抗毒素则不能。食品中存活的芽胞能在厌氧的环境和适宜的培养条件下生长并产生毒素，得以检出和定型。
设备和材料
细菌学开罐器。
研钵和研杵。
吸管：1.0,5.0,10.0和25.0mL。
培养试管(应有一些是带螺旋帽的）。
厌氧培养装置。
恒温培养箱，（28±1)℃及（35±1)℃。
显微镜(相差或明视野）。
平皿，皿底直径为90mm或100mm。
高速冷冻离心机。
用于接种小白鼠的注射器，1.0mL或3.0mL，带有5号针头。
小白鼠，体重约15〜20g(每一试验批应使用同一品系和同一性别的小白鼠）。
培养基和试剂
除特殊规定外，所有化学试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
碘酒(碘4%，溶于70%乙醇中）。
庖肉培养基，见附录A.1。
肝汤培养基，见附录A.2。
含有胰蛋白酶