进出口饲料中棉酚的测定（征求意见稿）.doc

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出入境检验检疫行业标准
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代替

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进出口饲料中棉酚的测定
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XX发布
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XX实施
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中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局   发布
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前  言
本标准是根据GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》制定。
本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：
本标准替代SN0535-1996；
本标准与SN0535-1996的主要差异如下：
——增加了确证方法
——技术指标满足多种基质和限量要求

进出口饲料中棉酚的测定
范围
本标准规定了饲料中棉酚的两种测定方法，高效液相色谱法（HPLC法）和液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS法）。
本标准适用于棉籽饼（粕）和饲料中棉酚的定量测定；液相色谱-质谱/质谱法的定性确证。
规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法。

第一法高效液相色谱法（HPLC法）
原理
试样用丙酮溶液提取，过滤膜，用高效液相色谱测定，外标法定量。
3.2试剂和材料
除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
丙酮：色谱纯。
甲醇：色谱纯。
磷酸。
丙酮溶液：准确量取70mL丙酮（3.2.1）和30mL水，混匀后备用。
磷酸溶液（0.1%）：准确量取1mL磷酸于1L容量瓶中，加水并定容至刻度，混匀后备用。
棉酚标准品：CAS：303-45-7，纯度为90.5%。
棉酚标准储备液：准确称取10mg(精确至0.1mg)棉酚标准品于10mL容量瓶中，用丙酮（3.2.1）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液，于4℃避光保存。
微孔滤膜：0.22μm，有机系。
仪器和设备
高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器。
电子天平：感量为0.01g和0.0001g。
离心机：转速不低于4000r/min。
振摇仪。
涡旋混匀器。
塑料离心管：50mL。
研钵。
3.4样品处理
称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入10mL水浸泡1h，加入23mL丙酮(3.2.1)，振摇20min。离心5min后，将上清液转移至50mL棕色容量瓶中，用10mL丙酮溶液(3.2.4)重复提取两次，用丙酮溶液(3.2.4)定容至50mL。静置5min，取上清液过微孔滤膜（3.3.7），供HPLC测定。
3.5高效液相色谱测定
3.5.1HPLC参考条件
a）色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm[内径(i.d.)]，5.0μm，或功能相当者。
b）流动相：甲醇（3.2.2）-磷酸溶液（3.2.5）（88+12，体积比），混匀。
c）流速：1.5mL/min。
d)波长：238nm。
e）柱温：25℃。
进样量：10μL。
3.5.2标准曲线绘制
用丙酮（3.2.1）将棉酚标准储备液逐级稀释得到的浓度为1、2、4、6、10μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。棉酚的标准品色谱图见附录A中图A.1。
3.5.3定量测定
待测样液中棉酚的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。
3.5.4结果计算
试样中棉酚的含量由色谱数据处理软件或按照式（1）计算获得：
……………………………（1）
式中：