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狂犬病病毒P和M蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备的综述报告
狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的急性传染病，可感染人类和许多动物，严重时甚至可导致死亡。狂犬病病毒是一种单股负链RNA病毒，外层具有刺突蛋白，主要包括病毒P和M蛋白。这两种蛋白都是狂犬病病毒引起免疫反应的重要抗原，因此它们的表达、纯化和制备对于狂犬病的研究和防治具有重要的意义，本文将对此进行综述报告。
一、病毒P和M蛋白的功能
狂犬病病毒P和M蛋白都是狂犬病病毒的外壳蛋白，其中P蛋白存在于病毒颗粒中，是病毒核壳的主要构成成分，可通过与病毒基因组RNA结合形成核衣壳复合物，保护病毒基因组RNA免受外界环境的影响。M蛋白则位于P蛋白的表面，起到桥梁作用，将病毒抗原分子推到病毒表面进行免疫反应。
二、狂犬病病毒P和M蛋白的原核表达
目前，原核表达系统被广泛应用于对蛋白质进行大规模表达和高效纯化。在狂犬病病毒P和M蛋白的原核表达中，大多数研究采用了大肠杆菌作为表达宿主。
在选择表达载体时，一般选择带有6×His标签的pET系列载体，这是因为6×His标签可以用于蛋白的亲和层析纯化和Westernblot检测，方便后续操作。同时，在表达过程中，添加表达助剂可以提高目标蛋白的表达量。例如，IPTG和L-arabinose的上调浓度会增加大肠杆菌BL21(DE3)菌株在开放表达系统中狂犬病病毒P蛋白的表达和纯化的效率和标准化。
三、狂犬病病毒P和M蛋白的纯化
狂犬病病毒P和M蛋白的纯化通常采用亲和层析技术，如Ni-NTA亲和层析柱，这种技术可以识别并结合带有6×His标签的蛋白质。当纯化完成后，通过对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE蛋白质电泳测定其纯度，同时通过Westernblot检测目标蛋白的存在和大小。
四、狂犬病病毒P和M蛋白的多克隆抗体制备
制备狂犬病病毒P和M蛋白的多克隆抗体通常采用多重免疫策略。首先，将纯化后的病毒P和M蛋白用于兔子、小鼠或大鼠的免疫，启动体内抗原特异性免疫应答。在注射后，将收集的血清用于IgG类别的纯化。随后，将纯化后的IgG免疫化到某一抗原料中，进行吸附和洗涤。最后，通过酸或热变性的方法从免疫柱上洗脱抗体。
总之，狂犬病病毒P和M蛋白的表达、纯化和制备对于研究和防治这种疾病具有重要意义。通过原核表达、亲和层析技术和多重免疫策略，可以获得高纯度的P和M蛋白以及多克隆抗体，有助于进一步深入研究狂犬病的防治措施。