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高糖和bFGF对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响的中期报告 这篇中期报告旨在探讨高糖和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化的影响。 研究设计: BMSCs源自小鼠胫骨骨髓。分为四组处理,分别是对照组(Ctrl)、高糖组(HG)、bFGF组(bFGF)、高糖加bFGF组(HG+bFGF)。对照组维持培养基稳定,高糖组培养基中添加高浓度葡萄糖(25mM)创造高糖环境。bFGF组添加5ng/ml的bFGF,高糖加bFGF组二者兼具高糖和bFGF刺激。 结果: 1.细胞形态 细胞呈轮廓整齐、丝状突起多、生长活力强的状况,呈梭形或星形;而经高糖长期刺激(3天和7天)后,BMSC三个细胞形态具有较大差异,表现为突起不平整、变得较短、内质网结构增加,形态变得不规则,生长活力下降;而bFGF处理组及其与高糖联合处理组的紧密排列、高度重叠、丝状突起较多,生长活力较强,且bFGF处理组的细胞较为胖圆。 2.成骨标记物 利用荧光检测成骨标记物碱性磷酸酶(ALP)活性。测定结果表明,在高糖环境下长期培养的BMSCs,ALP活性呈现降低趋势,而bFGF处理组的ALP活性受到显著的提升,高糖加bFGF处理组较高糖处理组略有提升。 3.基因表达 利用荧光定量PCR检测骨细胞成分的内生性特异基因表达,如骨钙素(BGLAP)、运动素受体(VDR)及Ⅰ型胶原(COL1A1)等。和对照组相比,高糖组BGLAP、VDR和COL1A1表达量降低,而添加bFGF后相继有所增加,其中VDR和COL1A1的增加可能与其对成骨途径的调节作用有关。 结论: 高糖环境对BMSC成骨分化有负面作用,而bFGF能够促进BMSC成骨分化,防止高糖环境的影响。