产肠毒素性大肠杆菌致病特性及益生菌的筛选与疾病控制研究.pdf

学校编码：10384分类号______密级

学号：200326051UDC

硕士学位论文

产肠毒素性大肠杆菌致病特性
及益生菌的筛选与疾病控制研究

TheResearchofPathogeneticCharacteristicsof
EnterotoxigenicEscherichiacoliandTheScreeningand
InhibitoryEffectofProbioticonPathogenicBacteria

朱红梅

指导教师姓名：周涵韬副教授

专业名称：发育生物学

论文提交日期：2006年6月
论文答辩时间：2006年8月
学位授予日期：2006年9月

答辩委员会主席：刘波
评阅人：

2006年7月

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年月日

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摘要

摘要

产肠毒素性大肠杆菌（EnterotoxigenicEscherichiacoli.，ETEC）是一类引起
人和幼畜（初生仔猪、犊牛、羔羊）腹泻的重要病原菌，初生幼畜被ETEC感染
后，常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡，发病率和死亡率均很高，给养殖业带
来严重的经济损失。目前，通过在饲料中添加抗生素进行防治是一条最主要的途
径。但近些年来，抗生素的由于耐药性、安全性等问题遭到了广泛的置疑和反对，

世界上很多国家都对饲料中添加抗生素实行了禁用或限用。益生素（Probiotics）
由于“无毒”、“无抗药性”、“无残留”、“无副作用”的特点，逐渐成为国

内外饲料添加剂研究的热点。
本文利用绿色荧光蛋白（Greenfluorescentprotein）标记技术研究ETEC致病
特性及筛选益生菌在体内、体外进行抑制致病菌研究，主要结果如下：
1．通过电击转化法，将带有gfp标记基因的pGLO质粒成功转化到产肠毒素

性大肠杆菌K88中，经过紫外检测及荧光显微镜检测均发现标记菌株发出绿色荧
光。进一步通过分子鉴定、脂肪酸分析、血清学鉴定发现标记菌株和原始菌株没

有差异。同时研究在不同微生物学培养条件如：温度、pH值、盐浓度培养条件

下，标记菌株的生长状态和原始菌株一致。

8
2．建立小白鼠K88、K88-GFP攻毒模型，K88的LD50为5.53×10CFU/mL，

8
K88-GFP的LD50为4.86×10CFU/mL。同时利用标记菌株自发荧光的特点研究感
染K88-GFP小白鼠的各器官致病菌的定植情况，发现在肝、肾中细菌最多，同时
在脑、肌肉中也有少量分布。并且分析感染K88的小白鼠的血液成分、血生化指
标的变化。K88对白细胞及相关指标的影响较大，WBC、W-SCC、W-LCC显著
降低；对红细胞及相关指标的影响较小，仅在6hRBC、HCT、HGB降低；对血
小板也有影响，PLT显著下降，MPV有所升高。K88对血液生化指标中反应肝、
肾功能的指标影响较大，ALT、AST和BUN、UA显著升高，而对反应脂代谢的
指标无影响，TCHO、TG与对照组相比无差异。
3．从土壤中筛选到的一株芽孢杆菌对K88、鸡大肠杆菌、沙门氏菌有抑制
作用，通过对其表型特征、生理生化特征、脂肪酸分析和16SrDNA序列分析的
多相分类研究，初步确定该菌株为短芽孢杆菌（Brevibacillusbrevis）。

-I-
摘要

4．在研究发酵动态对PBJK-2体外抑制K88、K88-GFP的影响时发现，30℃、
pH值7.5、发酵24h的原液，同时接入PBJK-2的抑菌效果最好。在对感染K88-GFP

的小白鼠模型的疾病控制研究时发现，腹腔注射PBJK-2的小白鼠LD50是不添加

PBJK-2的对照组LD50的1.34倍，延缓了小白鼠的死亡，具有一定的保护作用。
由此可见，短芽孢杆菌PBJK-2在体内、体外都