鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备及其斑点杂交方法的建立的综述报告.docx

鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备及其斑点杂交方法的建立的综述报告
鸡包涵体肝炎病毒（avianhepatitisBvirus，AHBV）是一种常见的禽类病毒，可以引起鸡类的肝脏病变和损伤。为了更好地研究该病毒的生物学特性和致病机制，需要建立一种高效的探针和检测方法，以便对该病毒进行更准确、快速、可靠的检测。本文将介绍关于鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备方法和斑点杂交技术的建立情况。
一、鸡包涵体肝炎病毒DNA探针制备方法
1.DNA模板提取
鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备需要用到该病毒的基因组DNA作为模板，在提取之前需要先进行病毒的分离和富集，一般采用超速离心法进行富集，再利用柱子法提取纯净的病毒DNA模板。
2.模板DNA纯化
将提取的病毒DNA模板进行纯化，可采用常规的氯仿提取法、酚/氯仿提取法、硅胶柱纯化法等方法，最终获取高质量的模板DNA。
3.引子设计
采用生物信息学工具对鸡包涵体肝炎病毒基因组进行序列分析，确定探针的序列和引物设计的位置，然后合成探针。
4.探针标记
对合成的探针进行标记，常用的方法有放射性标记法、荧光标记法和生物素标记法等。其中，放射性标记法利用32P等放射性同位素标记探针，是一种常用的探针标记方法。
5.探针的纯化与浓度检测
将标记好的探针进行纯化，并使用紫外分光光度计检测其浓度和纯度。
二、鸡包涵体肝炎病毒斑点杂交技术的建立
斑点杂交技术是一种重要的分子生物学技术，可以用于检测DNA和RNA等分子中特定序列的存在。下面将介绍关于鸡包涵体肝炎病毒斑点杂交技术的建立步骤。
1.内标记DNA探针的制备
将合成的DNA探针和内标记物（如32P同位素）进行反应，制备内标记DNA探针。
2.蛋白质提取
从鸡的肝脏中提取蛋白质，并进行电泳分离。
3.蛋白质印迹
将电泳分离的蛋白质印迹到硝酸纤维素膜上。
4.膜预处理
将印迹后的硝酸纤维素膜进行预处理，如水洗、去放射性同位素等操作。
5.DNA探针杂交
将内标记DNA探针溶液滴于预处理后的硝酸纤维素膜上，进行密封，然后进行孵育和洗涤等操作，使DNA探针与蛋白质进行杂交反应。
6.斑点检测
将处理后的膜放入放射自显像片中，暴露数小时即可观察到痕迹，从而判断检测结果。
综上所述，鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备和斑点杂交技术的建立，是进行病毒检测和研究的重要手段，可以提高鸡包涵体肝炎病毒的检测灵敏度和准确性，为病毒的研究提供有力支持。