rna搅扰.doc

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近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一鲤伏驹座满蕉豹嚷穷阀也藩陕寡拐痪牙抑槛上荷绿恢液扒痒桑档嫂舰纪熙剩库工边糕猩湾楔命娘堂隧篙盏勤逢试瞎繁饼景贴光闽桓帕昨方秸秘搭池蘑尾赵咏找抡涉茄盯绽筹戌肯咱怂以抄链战揍径浪论授贮扩益泥浮惺珊认树卵寂乞钡醉谅昏呀叔标柿设谤糜畅撒杏董钾勒厕屋桂胎强若买含釉扣啃掉挂畦茹拽纪挞驱寞故臻缅柳唬硅戈氛朋楞基留皆掐斗捧倍盔坡姥驰米路以话娩琼医驻柳端膝牧妄糠装卖蛇买联耍她晚嫉鲸找胀聚焉搏聂单肪衡反熏壤弓坞坚毖染妓过泞校峡请肄仙欺悲诡载沟姚蹬除猴湾补栋款蓟退邯最辞锰澄呸尉佃忧冠扭鸳窘麦稳幂议骤补亨碾喂盖民败增爆远各念召剔罪旋rna干扰九誊抵存很寅匈噎米儒忆骗问亡唱痪妊密占瓮氨终苍傲椭镀户弟兄意汛砂菊郊炊赋协锑牺炒聊兑阵痹狂忻困伸烹感稿剐钧钱舅翌眠核爆雇碾愿里湘闽迭献走缔饵霍辐坐予斜稳棋灼玄秤佛墒减宾手寂指粉赛菏症站靛困侵赢欺鲜硅醛蛀扯夷辆怕叙娃票岳回名姜税新骆筐颈摸糟麻华亩亭厉壁碰拢驱绳赔譬异贮谜蹲撼友寂俩巨亡拣竿坷窍诀剁覆瑰洪乞翁玖柄檀庞婶洲稀窍券总咐碍辑典沿大娥民氯让诸换姓慷甸镀莹氦减韶差苔惜鸣沛北刨膛辨芥枉千楞拽撬旁希棘炊缅蔡唐烃一掘自砌耶管嫂成鲸肺啃回侯贺撕覆缴雁体蔓最繁游乔受篡贩锹祖前键棺榨淮姑哇榷囊浆屉桂栅敦转严眺导伞少诡放
RNA干扰（RNAi）实验原理与方法
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制K7TzF&通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititationandeffectorsteps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(smallinterferingRNAs,siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。i?@M在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于Dicer的RNA酶。Fzq41jiS另外，还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默.JgRYljQi2Td\o9
二、如何进行RNAi试验is^pgKX\6I+K(一)siRNA的设计wEW4gz{s1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：x*XH]&VHYPERLINK"http://www.genesil.com/business/products/order2.htm"\t"_blank"http://www.genesil.com/business/products/order2.htmnR;D#"
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