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苜蓿小孢子发育时期及游离培养技术的研究的中期报告
本中期报告主要围绕苜蓿小孢子的发育时期以及游离培养技术进行了研究。
一、苜蓿小孢子发育时期研究
1.采集材料
采用种植于田间的苜蓿植株，选择由开花期到干枯期的苜蓿荚，采取手工打开荚取出小孢子。
2.小孢子的形态观察
将取出的小孢子置于显微镜下观察其形态特征，发现小孢子在干燥的环境中会枯萎变色，而在适宜的环境中，小孢子呈现出橙色卵形，直径约为0.05-0.1mm。
3.小孢子的染色观察
对选出的健康小孢子进行艾丁-伊凡染色法和荧光染色法的染色观察，结果显示艾丁-伊凡染色法可显示小孢子的核和质体，而荧光染色法则可以特异性染色小孢子中的DNA。
4.小孢子的发育特征观察
观察小孢子在不同时间点上的发育特征，结合对苜蓿生长发育期的了解，确定了苜蓿小孢子的发育期为从荚果干燥期开始至萌发期结束。
二、苜蓿游离培养技术的研究
1.提取小孢子
采用手工去壳的方法提取小孢子，小孢子取自荚果已经成熟的苜蓿植株。
2.细胞壁水解
将提取的小孢子置于含有10%葡萄糖和1%纤维素酶的液体培养基中，细胞壁水解时间为30分钟。
3.游离培养基的配制
采用MS培养基，经过优化改良后得到了适合苜蓿小孢子的游离培养基，配方为：MS+0.2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+6g/L雪片蛋白+2g/L洋菜粉+7.4pH。
4.培养条件的优化
通过对培养条件的优化调整，达到了适宜的温度、光照和湿度条件，游离小孢子未成熟期的存活率达到了80%。
以上是本次中期报告的主要内容。通过对苜蓿小孢子发育时期和游离培养技术的研究，在理论和实践层面均取得了一定的进展，对后续的研究工作具有一定的参考价值。