甲型流感病毒核蛋白融合基因的构建与表达以及siRNA抑制作用的研究的中期报告.docx

甲型流感病毒核蛋白融合基因的构建与表达以及siRNA抑制作用的研究的中期报告
【摘要】
甲型流感是一种常见且危害严重的病毒感染，疫苗存在制备效率低、抗原变异性高等问题。因此，研究满足人体免疫系统对甲型流感病毒抗原的需求的基因工程疫苗至关重要。本研究旨在构建甲型流感病毒核蛋白融合基因，并探究其在细胞中的表达情况以及siRNA抑制作用。
【材料和方法】
1.从甲型流感病毒基因组中提取核蛋白编码区域，并设计引物扩增核蛋白基因。
2.采用PCR扩增技术将核蛋白基因与融合标签(EK标签)进行融合，构建核蛋白融合基因。
3.将核蛋白融合基因插入真核表达质粒pCDNA3.1(+)-Myc，构建重组表达质粒pCDNA3.1(+)-Myc-NP-EK。
4.转染HEK293细胞，收集细胞上清用Westernblot检测融合蛋白的表达情况。
5.设计siRNA靶向病毒核蛋白基因，转染细胞，并采用Real-timePCR检测核蛋白基因表达水平。
【结果】
1.核蛋白融合基因成功构建，序列验证正确。
2.HEK293细胞成功转染pCDNA3.1(+)-Myc-NP-EK和控制质粒，Westernblot结果显示表达出慢波段蛋白(NP)和EK标签融合蛋白。
3.采用Real-timePCR检测，siRNA抑制后核蛋白基因表达水平下降。
【结论】
本研究成功构建了甲型流感核蛋白融合基因并表达出融合蛋白，同时探究了siRNA对核蛋白基因的抑制作用，为甲型流感基因工程疫苗的开发提供了基础数据支持。