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抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备和鉴定的中期报告 本实验室正致力于制备具有高效、特异性的抗狂犬病病毒单克隆抗体。在本期实验中,我们成功地完成了病毒蛋白的表达、纯化以及抗原的制备,同时通过小鼠免疫、融合和筛选等步骤,得到了一些潜在的单克隆抗体。 具体步骤如下: 1.表达和纯化病毒蛋白 本实验以狂犬病病毒的G蛋白为靶标进行单克隆抗体制备。我们首先构建了一个包含G蛋白的质粒,并将其转化到大肠杆菌中进行表达。随后,我们通过离心和超声裂解对细胞进行破裂,收集包含目标蛋白的细胞裂解液,并使用柱层析等方法进行纯化。 2.抗原的制备 为了获得高质量的G蛋白,我们将其纯化后进行Westernblot检测,同时利用SDS-PAGE检测其纯度。结果表明我们可以在获得高质量的抗原。 3.小鼠免疫 我们使用BALB/c小鼠进行免疫,将纯化的抗原注射到小鼠身上。在接种后的两周内,我们多次对小鼠进行免疫并检测其免疫反应的强度。 4.细胞融合 两周后,我们收集小鼠的脾脏并进行细胞融合。融合细胞筛选出的细胞在HAT培养基上进行培养,以筛选出对目标抗原具有特异性的细胞。 5.单克隆抗体的筛选和鉴定 我们用ELISA和Westernblot等方法鉴定细胞培养上清中的单克隆抗体,同时进行亚型鉴定和亲和力测定。经过筛选和鉴定,我们获得了一些具有潜在应用价值的单克隆抗体。 总结: 通过本期实验,我们成功地制备了高纯度的狂犬病病毒G蛋白抗原,并筛选得到了一些潜在的单克隆抗体。我们将进一步开展下一步实验,进一步鉴定和评估这些单克隆抗体的优异性能以及应用前景。