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枸杞多糖的分级及其细胞凋亡诱导活性研究的中期报告
摘要：
本文对枸杞多糖进行了分级，用不同分子量的枸杞多糖处理人类肝癌细胞SMMC-7721，结果显示，较高分子量的枸杞多糖（>10kDa）对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用更显著，并且同时观察到了细胞凋亡的现象。
进一步地，我们分析了较高分子量的枸杞多糖诱导SMMC-7721细胞凋亡的机制。结果表明，较高分子量的枸杞多糖可抑制细胞内Bcl-2蛋白的表达，同时增加Bax蛋白的表达。这种Bcl-2/Bax比例的改变导致了线粒体膜电位的下降，活性氧（ROS）的增加，最终诱导了细胞凋亡。
本研究结果表明，枸杞多糖对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与其分子量相关，并且较高分子量的枸杞多糖可以通过调控细胞凋亡相关蛋白的表达，诱导肝癌细胞凋亡，为进一步研究枸杞多糖对肝癌的治疗作用提供了新思路。
关键词：枸杞多糖；分子量；肝癌细胞；凋亡
Introduction:
枸杞多糖是一种来源于枸杞果实的多糖类化合物，具有多种生物活性。已经有研究表明，枸杞多糖对肿瘤细胞有一定的抑制作用。然而，枸杞多糖的分子量对其抑制作用是否具有影响，还不清楚。此外，枸杞多糖对细胞凋亡的作用机制也有待深入研究。
Methods:
1.枸杞多糖的分级
2.SMMC-7721细胞的培养和处理
3.细胞增殖实验
4.细胞凋亡检测
5.Westernblotting法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达
6.检测线粒体膜电位和ROS的水平
Results:
1.枸杞多糖的分级
我们使用琼脂糖柱层析法对枸杞多糖进行了分级，并且用紫外光谱检测了各级多糖的分子量。结果显示，我们得到了五个不同分子量的枸杞多糖，分别是>50kDa，10-50kDa，5-10kDa，3-5kDa和<3kDa。
2.枸杞多糖对SMMC-7721细胞增殖的影响
我们用MTT法检测了不同分子量的枸杞多糖对SMMC-7721细胞增殖的影响。结果显示，较高分子量的枸杞多糖（>10kDa）对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用更显著。
3.枸杞多糖诱导SMMC-7721细胞凋亡的机制
我们用DAPI染色和AnnexinV-FITC/PI双染法检测了不同分子量的枸杞多糖对SMMC-7721细胞凋亡的影响。结果显示，较高分子量的枸杞多糖（>10kDa）可以显著诱导SMMC-7721细胞的凋亡。
我们用Westernblotting法检测了Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果显示，较高分子量的枸杞多糖可以抑制Bcl-2蛋白的表达，同时增加Bax蛋白的表达。此外，我们还用JC-1荧光探针检测了线粒体膜电位的水平，检测了ROS的水平。结果显示，较高分子量的枸杞多糖可以降低线粒体膜电位，同时增加ROS的水平，从而诱导SMMC-7721细胞发生凋亡。
Conclusion:
本研究结果表明，枸杞多糖对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与其分子量相关，并且较高分子量的枸杞多糖可以通过调控细胞凋亡相关蛋白的表达，诱导肝癌细胞凋亡。这为进一步研究枸杞多糖的抗肝癌作用提供了新思路。